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Organización dirigida de los complejos proteínicos

La inmovilización controlada de proteínas es una técnica muy utilizada en muchas aplicaciones biotecnológicas. Un proyecto europeo se propuso desarrollar un sistema para controlar el ensamblado estructural de un complejo multiproteico.
Organización dirigida de los complejos proteínicos
La organización espacial definida es fundamental para las aplicaciones biotecnológicas modernas de proteínas, incluyendo la inmovilización de anticuerpos o la creación de nanoestructuras sobre los modelos biológicos. La mayoría de las técnicas utilizadas en la actualidad no permiten la coinmovilización controlada a nivel molecular de muchas proteínas.

El proyecto financiado por la Unión Europea DECODEB (Defined co-immobilization by DNA binding protein tags) desarrolló una tecnología para crear estructuras cuaternarias más avanzadas de proteínas en solución y sobre superficies. El principal objetivo fue crear un sistema de marcación de la fusión de proteínas que permite la coinmovilización de proteínas mediante interacciones entre el ADN y las proteínas. Como marcadores de fusión se utilizaron proteínas de fijación al ADN que reconocen diferentes secuencias con alta afinidad de unión para proporcionar el enlace de interacción del ADN con las proteínas de secuencia específica.

Se sintetizaron, expresaron y purificaron las variantes de tres marcadores de proteínas y se evaluó su fijación con estudios electroforéticos de cambios de movilidad. Todas las variantes de los marcadores de fijación al ADN demostraron una cofijación simultánea muy específica a diferentes sondas de ADN de doble hebra con sus secuencias de ADN.

Como estudio preliminar de eficacia, los científicos analizaron la estrategia de fusión con ligación proteínica mediada y entrecruzamiento químico controlado de las proteínas diana nativas con los marcadores de proteínas de fijación al ADN. Se adoptó este estudio para el proyecto pues brindó los mejores resultados.

El sistema de coinmovilización diseñado logró utilizarse para amplificar las señales en el desarrollo de biosensores de ADN. El uso del conjugado de peroxidasa e indicador para amplificar las señales en el genosensor del virus del papiloma HPV16 ha abierto las posibilidades para su aplicación como molécula de detección universal. En conclusión, las actividades de DECODEB demostraron la utilidad de los conjugados para la detección de moléculas diana y la amplificación de señales.

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Palabras clave

Complejos proteínicos, inmovilización de proteínas, DECODEB, marcación por fijación al ADN, biosensor de ADN
Número de registro: 190509 / Última actualización el: 2016-11-10
Dominio: Biología, Medicina
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