Description du projet
Des clichés rapides et précis de l’activité synaptique
Les exigences incompatibles en matière d’optique et de sonde dans les technologies actuelles entravent les études de dynamiques rapides avec une précision intra-synaptique. Il s’agit d’un défi de taille pour l’imagerie fonctionnelle en temps réel des activités cérébrales. Le projet InSpIRe, financé par l’UE, entend le relever. Il développera une plateforme optique qui permet d’obtenir une imagerie volumétrique en temps réel des tissus cérébraux avec un niveau intra-synaptique de détail grâce à un nouveau dispositif optique couplé aux propriétés photosensibles des sondes décalées vers le rouge récemment conçues. Il tirera profit de rsFusionRed, une nouvelle palette de protéines fluorescentes commutées de manière réversible. Comme preuve de principe, il étudiera les dynamiques du réticulum endoplasmique, qui sont peu connues dans les synapses, et pourrait les montrer avec précision.
Objectif
Modern fluorescence microscopy can provide rapid, real-time functional imaging of brain activities (light sheet) or to visualize with high definition and specificity the synaptic organization (super resolution, expansion). However, rapidity and precision are still too far apart to allow studies of fast dynamics with intra-synaptic precision mainly due to incompatible optical and probes requirements in current technologies. My aim is to fill this gap with the development of an optical platform, named InSpIRe, which allows real-time volumetric imaging of brain tissues with intra-synaptic level of details thanks to a new optical scheme coupled to the photo-switching properties of recently engineered red-shifted probes. InSpIRe will take advantage of rsFusionRed, a new palette of reversibly switching fluorescent proteins, which we recently introduced. The contrast and photo-resistance of rsFusionRed imaging will be increased with an optical strategy that uncouple the geometry of the illumination for switching and fluorescence excitation, which we demonstrated in our MoNaLISA microscope. In InSpIRe these concepts are brought to a new level to record volumetric dynamics in brain tissues without compromising resolution and speed. We will craft a new interference pattern, which optically imprint small-sub-resolved- volumes of rsFusionRed in the 3D tissues architecture. These volumes will be read-out with an oblique sheet of light to increase speed and minimize photo-bleaching. Unlike lattice light sheet we use one objective lens, which increases the slice accessibility and unlike STED/STORM the acquisition is faster. InSpIRe will record movies with molecular resolution without losing the larger neuronal architecture, which can shine light to open question in the field of organelles trafficking. As a proof of principle, we will study the dynamics of the endoplasmic reticulum, which are little known in synapses, and which we could, for the first time, show with precision.
Champ scientifique (EuroSciVoc)
CORDIS classe les projets avec EuroSciVoc, une taxonomie multilingue des domaines scientifiques, grâce à un processus semi-automatique basé sur des techniques TLN.
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Mots‑clés
Programme(s)
Régime de financement
ERC-COG - Consolidator GrantInstitution d’accueil
100 44 Stockholm
Suède