Objectif
Background
In all living organisms, the translocation of the polypeptides through a membrane is a basic process of the secretory pathway of proteins. Manipulation of this process could be economically very important because it appears that many proteins are poorly secreted by heterologous hosts; the understanding of the critical components of the secretory apparatus may enable the construction of specifically engineered host strains in order to maximize the secretion of foreign proteins.
Objectives
The transport process may be divided in three main steps: first, recruitment and presentation of the polypeptides to the translocation apparatus, secondly translocation through the membrane itself and thirdly refolding of the polypeptide in the endoplasmic reticulum (ER) lumen. Our project has covered these aspects. It has combined results derived from various organisms using very different techniques so that a link will be established between the in vitro tools developed in higher eukaryotes and the genetic tractability of yeasts.
In Y. lipolytica (Lab A), components of the translocation apparatus were identified either by reverse genetics (Sec61, Sec62) or by genetic screening (Sls1p and Tsr1p). Sls1p was identified as a mutant colethal with a thermosensitive form of SRP; it is a component of the ER lumen, but it is tightly involved in the translocation process. Tsr1p, initially characterized as a suppressor mutation of the thermosensitive SRP form is a component of the ER membrane and was shown to interact with SRP and ribosome. An homologue in S. cerevisiae, yhc8p, was shown to be involved in translocation.
Sss1p (LabB), a component of the translocation pore, was shown to span the ER membrane once exposing its amino-terminal half to the cytoplasm. By NMR, this N-terminal domain in canine Sec61gamma (Sss1p homologue) appeared to acquire an alphahelix-loop-alphahelix secondary structure. Sec61p and two other proteins were identified by cross-linking to be in close proximity to Sss1p. Sss1p and Sec61p showed mutually stabilizing interactions. The interactions of these two proteins were mapped to the region covering Sec61p transmembrane segment 8 (in cooperation with Lab C). Srp40p, a multicopy suppressor of a sec61-mutant, localizes to punctate nuclear structures. SRP40 appears to play a dose-sensitive role in preribosome assembly or transport.
In labC, the topology of Sec61p, the main component of the translocation pore was established by a combination of approaches (cloning of homologues in S.pombe and Y.lipolytica (LabA), fusion with a C-terminal reporter protein Suc2p and insertions of factor Xa cleavage sites). A collection of Sec61 mutations was constituted. A novel member of the Hsp70 family Lhs1p localised within the ER lumen was identified. This protein is required for the efficient translocation of a number of secretory protein precursors across the ER membrane.
In LabD, the heptameric and trimeric translocation complexes were purified. A second trimeric complex (Ssh1p complex) was identifiedin yeast. The genes encoding new components Ssh1p, Sbh1p and Sbh2p were cloned and studied. These components have homologues in translocation systems in bacteria, archea and eukaria. The role of these different complexes was established in vivo. An in vitro posttranslational protein trasnslocation system was reconstituted using purified Sec-complex and Kar2p as the only components.
Major scientific breakthroughs
The components of the translocation pores were purified. The structures of some of their components (Sec61p, Sss1p) were described at the molecular level through biochemical experiments and NMR studies. These studies change our view of the translocation process: three translocation pores, two Hsp70 chaperones (Kar2p, Lhs1p) on the lumenal side of the ER, a new polypeptide involved in the docking of SRP displaying a large lumenal domain interacting with Kar2p... The challenge is now to give an integrated view of the translocation machinery and to understand how the different secretory polypeptides are channeled in the two translocation pores.
Champ scientifique (EuroSciVoc)
CORDIS classe les projets avec EuroSciVoc, une taxonomie multilingue des domaines scientifiques, grâce à un processus semi-automatique basé sur des techniques TLN. Voir: Le vocabulaire scientifique européen.
CORDIS classe les projets avec EuroSciVoc, une taxonomie multilingue des domaines scientifiques, grâce à un processus semi-automatique basé sur des techniques TLN. Voir: Le vocabulaire scientifique européen.
- sciences naturelles sciences biologiques microbiologie bactériologie
- sciences naturelles mathématiques mathématiques pures topologie
- sciences naturelles sciences biologiques biochimie biomolécule protéines
- sciences naturelles sciences biologiques génétique mutation
Vous devez vous identifier ou vous inscrire pour utiliser cette fonction
Programme(s)
Programmes de financement pluriannuels qui définissent les priorités de l’UE en matière de recherche et d’innovation.
Programmes de financement pluriannuels qui définissent les priorités de l’UE en matière de recherche et d’innovation.
Thème(s)
Les appels à propositions sont divisés en thèmes. Un thème définit un sujet ou un domaine spécifique dans le cadre duquel les candidats peuvent soumettre des propositions. La description d’un thème comprend sa portée spécifique et l’impact attendu du projet financé.
Les appels à propositions sont divisés en thèmes. Un thème définit un sujet ou un domaine spécifique dans le cadre duquel les candidats peuvent soumettre des propositions. La description d’un thème comprend sa portée spécifique et l’impact attendu du projet financé.
Appel à propositions
Procédure par laquelle les candidats sont invités à soumettre des propositions de projet en vue de bénéficier d’un financement de l’UE.
Données non disponibles
Procédure par laquelle les candidats sont invités à soumettre des propositions de projet en vue de bénéficier d’un financement de l’UE.
Régime de financement
Régime de financement (ou «type d’action») à l’intérieur d’un programme présentant des caractéristiques communes. Le régime de financement précise le champ d’application de ce qui est financé, le taux de remboursement, les critères d’évaluation spécifiques pour bénéficier du financement et les formes simplifiées de couverture des coûts, telles que les montants forfaitaires.
Régime de financement (ou «type d’action») à l’intérieur d’un programme présentant des caractéristiques communes. Le régime de financement précise le champ d’application de ce qui est financé, le taux de remboursement, les critères d’évaluation spécifiques pour bénéficier du financement et les formes simplifiées de couverture des coûts, telles que les montants forfaitaires.
Coordinateur
78850 Thiverval-Grignon
France
Les coûts totaux encourus par l’organisation concernée pour participer au projet, y compris les coûts directs et indirects. Ce montant est un sous-ensemble du budget global du projet.