Objetivo
The objective of the current proposal is to produce stable, immortalized lines of human endothelial cells, safe for use, which retain their functional properties and have been fully evaluated for pharmacological and toxicological testing. This objective will require innovative strategies for "minimal immortalization" where metabolic disruption induced by the immortalizing gene product is engineered down to a minimum.
The endothelium constitutes the internal lining of the circulatory system and plays a pivotal role in the maintenance of the vessel wall integrity. The alteration of the functional properties of endothelial cells is the first step in the development of cardiovascular diseases such as astherosclerosis and myocardinal infarction. The possibility to isolate and study these cells invitro is limited by their short life span. This work concerns the possibility to immortalize cultured human endothelial cells by inserting specific oncogenes.
The first objectives of this work include immortalization of endothelial cells with retroviral vectors; construction of new viral vectors; and establishment of functional assay system for endothelial cells.
Results achieved to date are:
two human endothelial cell lines transfected with retroviral constructs and two distinct oncogenes have been developed and have been characterized for specific markers and for morphological parameters; plasmid vectors have been prepared; functional assays for evaluating a series of functional activities of endothelial cells have been set up; assays for the screening of substances with potential toxicology effects have been established.
Human endothelial cells (HEC) in culture are a vital cellular model in the study of vascular diseases. The development of HEC lines retaining their differentiated characteristics would prove an invaluable tool for pharmacological and toxicological studies. Previous attempts have resulted in HEC lines either with substantially altered properties or, when amphotropic pseudotypes of murine sarcoma virus were used, not fully safe in terms of infection of the workers. The current proposal describes innovative molecular biology strategies that will be used to test the effect of a series of genes with the potential to immortalize/transform cells. Three different approaches will be followed. The first two will use either retroviral or EBV vectors which will allow efficient introduction of the gene of interest into HEC and provide a screening method for a variety of oncogenes, growth factor genes and receptor genes. The third approach will use integrative
plasmids which will allow the manipulation of gene expression using heterologous promoters to achieve 'minimal immortalization' i.e. where metabolic disruption induced by the immortalizing gene product is engineered down to a mimimum. The HEC lines will be then characterized for their growth characteristics and specific endothelial markers. In addition a full pharmacological and toxicological assessment of the HEC lines' responses will be performed.
Ámbito científico (EuroSciVoc)
CORDIS clasifica los proyectos con EuroSciVoc, una taxonomía plurilingüe de ámbitos científicos, mediante un proceso semiautomático basado en técnicas de procesamiento del lenguaje natural. Véas: El vocabulario científico europeo..
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- ciencias médicas y de la salud medicina clínica angiología enfermedades vasculares
- ciencias naturales ciencias biológicas microbiología virología
- ciencias médicas y de la salud medicina clínica cardiología enfermedad cardiovascular
- ciencias médicas y de la salud medicina básica toxicología
- ciencias naturales ciencias biológicas biología molecular
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Programa(s)
Programas de financiación plurianuales que definen las prioridades de la UE en materia de investigación e innovación.
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Tema(s)
Las convocatorias de propuestas se dividen en temas. Un tema define una materia o área específica para la que los solicitantes pueden presentar propuestas. La descripción de un tema comprende su alcance específico y la repercusión prevista del proyecto financiado.
Datos no disponibles
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Convocatoria de propuestas
Procedimiento para invitar a los solicitantes a presentar propuestas de proyectos con el objetivo de obtener financiación de la UE.
Datos no disponibles
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Régimen de financiación
Régimen de financiación (o «Tipo de acción») dentro de un programa con características comunes. Especifica: el alcance de lo que se financia; el porcentaje de reembolso; los criterios específicos de evaluación para optar a la financiación; y el uso de formas simplificadas de costes como los importes a tanto alzado.
Régimen de financiación (o «Tipo de acción») dentro de un programa con características comunes. Especifica: el alcance de lo que se financia; el porcentaje de reembolso; los criterios específicos de evaluación para optar a la financiación; y el uso de formas simplificadas de costes como los importes a tanto alzado.
Coordinador
20157 MILANO
Italia
Los costes totales en que ha incurrido esta organización para participar en el proyecto, incluidos los costes directos e indirectos. Este importe es un subconjunto del presupuesto total del proyecto.