Objetivo
We have chosen as a model the truncated (residues 20-83) form of the chymotrypsin inhibitor-2 (CI-2), one of the shortest sequences known to adopt a stable native conformation. Which residues and combinations of side chain interactions are critical for specifying the native and stable fold of CI-2? In an attempt to answer to this question, we propose to develop a phage display and a colony screening procedures that would provide a means to select variants of CI-2 that fold from large libraries. The premise underlying the selection is that binding of CI-2 to chymotrypsin requires the protein be properly folded. We will construct two independent mutant libraries using doped oligodeoxyribonucleotides mutagenesis but holding constant the residues involved in binding. Phages corresponding to combinations of mutations that restore the CI-2 fold will be retrieved by affinity selection from a known CI-2 variant with disrupted folding. Residues critical for specifying the fold of CI-2 will be identified by randomizing the remaining "scaffold" residues of CI-2 wild-type. Colonies that lose the binding activity then allow recovery of non viable scaffold sequences. The structure of folded CI-2 variants will be analysed using biophysical methods. The folding pathway of CI-2 variants will be compared to that of I CI-2. Characterization of the thermodynamics and kinetics of these mutants should yield insights into the sequence determinants of protein folding.
Key words: chymotrypsin inhibitor-2, protein folding-stability, protein engineering combinatorial mutagenesis, phage display.
The aim of this project is a better understanding of the relationships between protein folding and amino acid sequence by varying the sequence and examining the effect of these changes on both structure and folding pathway. Enhanced understanding of the folding problem requires further applications of protein engineering strategies that combine the tools of recombinant DNA technology with more classical protein chemistry methods. Our protein engineering strategy should be a powerful tool to aid in deciphering the rules governing protein folding. A better understanding of how amino acid sequences specify structure, activity and stability is important to design proteins with rationally devised novel properties. Futhermore, the identification of the sequence determinants of protein folding may help to avoid problems of aggregation or proteolysis, ultimately leading to improved yields of products for biotechnology industry.
Ámbito científico (EuroSciVoc)
CORDIS clasifica los proyectos con EuroSciVoc, una taxonomía plurilingüe de ámbitos científicos, mediante un proceso semiautomático basado en técnicas de procesamiento del lenguaje natural. Véas: El vocabulario científico europeo..
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- ciencias naturales ciencias biológicas microbiología virología
- ciencias naturales ciencias biológicas genética ADN
- ciencias naturales ciencias biológicas bioquímica biomoléculas proteínas plegamiento de proteínas
- ciencias naturales ciencias biológicas genética mutación
- ciencias naturales ciencias químicas química orgánica aminas
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Programa(s)
Programas de financiación plurianuales que definen las prioridades de la UE en materia de investigación e innovación.
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Tema(s)
Las convocatorias de propuestas se dividen en temas. Un tema define una materia o área específica para la que los solicitantes pueden presentar propuestas. La descripción de un tema comprende su alcance específico y la repercusión prevista del proyecto financiado.
Las convocatorias de propuestas se dividen en temas. Un tema define una materia o área específica para la que los solicitantes pueden presentar propuestas. La descripción de un tema comprende su alcance específico y la repercusión prevista del proyecto financiado.
Convocatoria de propuestas
Procedimiento para invitar a los solicitantes a presentar propuestas de proyectos con el objetivo de obtener financiación de la UE.
Datos no disponibles
Procedimiento para invitar a los solicitantes a presentar propuestas de proyectos con el objetivo de obtener financiación de la UE.
Régimen de financiación
Régimen de financiación (o «Tipo de acción») dentro de un programa con características comunes. Especifica: el alcance de lo que se financia; el porcentaje de reembolso; los criterios específicos de evaluación para optar a la financiación; y el uso de formas simplificadas de costes como los importes a tanto alzado.
Régimen de financiación (o «Tipo de acción») dentro de un programa con características comunes. Especifica: el alcance de lo que se financia; el porcentaje de reembolso; los criterios específicos de evaluación para optar a la financiación; y el uso de formas simplificadas de costes como los importes a tanto alzado.
Coordinador
CB2 2QH Cambridge
Reino Unido
Los costes totales en que ha incurrido esta organización para participar en el proyecto, incluidos los costes directos e indirectos. Este importe es un subconjunto del presupuesto total del proyecto.