Objetivo
The main goal of this project is the synthesis and study of new oligonucleotide-intercalator conjugates designed to inhibit specifically HIV DNA integration into the infected cell genomes. These oligonucleotides-intercalator conjugates will be designed to bind to the cognate sequences of HIV integrase, the viral enzyme that is responsible for the whole process of DNA integration. These sequences contain short alternated purine tracts susceptible to be targeted by appropriate triple helix-forming oligonucleotides (TFO) provided that the short triple helix be stabilized with a DNA intercalating agent. These oligonucleotides can form two contiguous triplexes switching from one strand to the opposite one. During the first part of the project, oligonucleotidic sequences will be systematically screened for their capability to form a stable switch triplex with the target DNA. Such oligonucleotides will fall into two classes: Oligonucleotide with a natural 5'-3' polarity and oligonucleotides with an alternated 5'-5' polarity. 5'-3' oligonucleotides will be synthesized by standard procedures whereas polymer supports containing thymidine residues modified at the 4-position of thymine will be prepared , in Moscow, Russia, and used for synthesis of 5'-5' oligonucleotides. Since most sequences should contain C-residues that are not able to form stable triplex at neutral pH, C-analogs such as 6-oxocytidine will be developped and synthesized in Frankfurt, Germany, in order to be incorporated in place of C residues. These oligonucleotides capable to form short triple-helices with HIV DNA extremity will be sequently functionnalized at both ends with intercalating agents. This functionnalization should i) stabilize dramatically the short triple-helical complex and ii) greatly improve the stability of the oligonucleotides against nucleases degradation. Several intercalators, including acridine, oxazolopyridocarbazole (OPC), daunomycine and anthraquinone will be tethered to both 5' and 3' ands of the oligonucleotides. Several approaches for oligonucleotide derivatization will be developped. In particular: i) New polymer support allowing 3'-tethering with anthraquinone will be prepared and used; ii) OPC-modified nucleoside will be synthesized and incorporated at the end of the oligonucleotidic sequence. Alternatively, OPC-oligonucleotides conjugates will be synthesized by treatment of activated oligonucleotide with amino-containing OPC. The ability of these conjugates to form stable triple-helical complexes with the HIV target will be determined in Chernogolovka, Russia, using quantitative footprinting, melting temperature measurements and non denaturing electrophoresis methods. Anti-integrase activity will be studied in Paris, France. In vitro assays involving recombinant integrase and oligonucleotidic strates will be performed. Finally, ex vivo activity against de novo infection of HeLa-CD4-ß-gal and CEM cells by HIV-1 will be undertaken with the best conjugate candidates. Should this approach prove successful, it could i) lead to a new class of HIV inhibitors and ii) lay the foundation for a new rationale of triple-helix forming oligonucleotides design. Moreover, during the course of this work, new methods for i) oligonucleotides-intercalators conjugates synthesis and ii) C-base analogs will be developped.
Programa(s)
Programas de financiación plurianuales que definen las prioridades de la UE en materia de investigación e innovación.
Programas de financiación plurianuales que definen las prioridades de la UE en materia de investigación e innovación.
Tema(s)
Las convocatorias de propuestas se dividen en temas. Un tema define una materia o área específica para la que los solicitantes pueden presentar propuestas. La descripción de un tema comprende su alcance específico y la repercusión prevista del proyecto financiado.
Datos no disponibles
Las convocatorias de propuestas se dividen en temas. Un tema define una materia o área específica para la que los solicitantes pueden presentar propuestas. La descripción de un tema comprende su alcance específico y la repercusión prevista del proyecto financiado.
Convocatoria de propuestas
Procedimiento para invitar a los solicitantes a presentar propuestas de proyectos con el objetivo de obtener financiación de la UE.
Datos no disponibles
Procedimiento para invitar a los solicitantes a presentar propuestas de proyectos con el objetivo de obtener financiación de la UE.
Régimen de financiación
Régimen de financiación (o «Tipo de acción») dentro de un programa con características comunes. Especifica: el alcance de lo que se financia; el porcentaje de reembolso; los criterios específicos de evaluación para optar a la financiación; y el uso de formas simplificadas de costes como los importes a tanto alzado.
Régimen de financiación (o «Tipo de acción») dentro de un programa con características comunes. Especifica: el alcance de lo que se financia; el porcentaje de reembolso; los criterios específicos de evaluación para optar a la financiación; y el uso de formas simplificadas de costes como los importes a tanto alzado.
Datos no disponibles
Coordinador
94805 Villejuif
Francia
Los costes totales en que ha incurrido esta organización para participar en el proyecto, incluidos los costes directos e indirectos. Este importe es un subconjunto del presupuesto total del proyecto.