Objetivo
A study has been made of the structure and function of yeast cytochrome c oxidase using genetic, biochemical and biophysical techniques. Work has been carried out in the following areas:
establishment of a new optical screening method for the assay of oxidase levels in yeast strains by direct analysis of spots growing on agar plates (a very sensitive technique has been developed for the direct analysis by visible spectrophotometry of yeast spots growing on agar plates);
studies on site directed mutants of the homologous cytochrome bo from Escherichia coli and development of a working model of the structure of subunit I (studies were extended to include analyses of mutant forms of a bacterial analogue of cytochrome oxidase, termed cytochrome bo);
generation and characterization of new yeast mutants of COXI, II and III from an intronless yeast strain (a large number of cytochrome oxidase mutants were isolated from the newly constructed intronless wild type strain of yeast)
generation of new yeast mutants of COXI from an intron containing yeast strain (172 cytochrome oxidase mutants were isolated from an intron containing strain, with mutations located in COXI and each of these was characterized genetically);
site directed mutagenesis of yeast oxidase (site directed mutagenesis was achieved by 'biolistics' of H234 in COXI and the resulting mutant did not contain detectable cytochrome oxidase);
generation and characterization of second site revertants from primary yeast mutants of COXI, II and III from an intronless yeast strain (success in generation of second site revertants has now been achieved);
purification and protein chemistry of yeast cytochrome oxidase (wild type and several mutant yeast strains have been purified, mutants were selected and good resolution of the polypeptide subunit pattern has been achieved);
biochemical/biophysical characterization of enzymes (wild type enzyme has been characterized in terms of subunit composition, ligand binding, turnover number and other kinetic parameters, spectral properties, behaviour after laser photolysis of carbon monoxide and cyanide, and steady state kinetic behaviour).
The aim of the work is to produce a mechanistic/structural model of cytochrome oxidase by studying functional aspects of a variety of yeast mutants with a modified cytochrome oxidase. Such mutants can be selected as revertants of deficient cytochrome oxidase mutants of known nucleotide changes which are localisated in the mitochondrial genes coding for subunits of cytochrome oxidase. Techniques for the rapid screening of a large number of such revertants will be developed so that those of particular interest can be identified. Selected revertants will be characterised in terms of change (s) in amino acid residues and a range of
biochemical and biophysical studies will be used to localise the functional alterations which are caused by such changes.
Ámbito científico (EuroSciVoc)
CORDIS clasifica los proyectos con EuroSciVoc, una taxonomía plurilingüe de ámbitos científicos, mediante un proceso semiautomático basado en técnicas de procesamiento del lenguaje natural. Véas: El vocabulario científico europeo..
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- ciencias naturales ciencias químicas química inorgánica compuestos inorgánicos
- ciencias naturales ciencias biológicas genética mutación
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Programa(s)
Programas de financiación plurianuales que definen las prioridades de la UE en materia de investigación e innovación.
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Tema(s)
Las convocatorias de propuestas se dividen en temas. Un tema define una materia o área específica para la que los solicitantes pueden presentar propuestas. La descripción de un tema comprende su alcance específico y la repercusión prevista del proyecto financiado.
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Convocatoria de propuestas
Procedimiento para invitar a los solicitantes a presentar propuestas de proyectos con el objetivo de obtener financiación de la UE.
Datos no disponibles
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Régimen de financiación
Régimen de financiación (o «Tipo de acción») dentro de un programa con características comunes. Especifica: el alcance de lo que se financia; el porcentaje de reembolso; los criterios específicos de evaluación para optar a la financiación; y el uso de formas simplificadas de costes como los importes a tanto alzado.
Régimen de financiación (o «Tipo de acción») dentro de un programa con características comunes. Especifica: el alcance de lo que se financia; el porcentaje de reembolso; los criterios específicos de evaluación para optar a la financiación; y el uso de formas simplificadas de costes como los importes a tanto alzado.
Coordinador
PL30 4AU Bodmin
Reino Unido
Los costes totales en que ha incurrido esta organización para participar en el proyecto, incluidos los costes directos e indirectos. Este importe es un subconjunto del presupuesto total del proyecto.