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New diagnostic system for specific and fast detection of multiple nucleic acid mutations by PNA hybridization on an array sensor

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Détection des anomalies génétiques en temps réel grâce à la fluorescence

Les recherches actuelles en biologie moléculaire portent sur l'étude du couplage des acides nucléiques et la détection des anomalies. Dans ce domaine, un nouveau schéma de détection a été développé qui permet de contrôler simultanément de nombreux événements de couplage et ainsi de détecter les anomalies en temps réel, à l'aide de la fluorescence.

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Notre patrimoine génétique, encore appelé ADN, est constitué d'acides nucléiques qui s'unissent à des acides nucléiques partenaires pour former deux chaînes reliées ensemble par une structure hélicoïdale double. Des problèmes génétiques apparaissent lorsque ces réactions d'assemblage se produisent de façon incorrecte. En général, les systèmes diagnostiques actuels détectent les anomalies génétiques en couplant ces acides nucléiques à un acide nucléique sonde, afin de créer un hybride. Le test contient une sorte d'indicateur ou de traceur, souvent un colorant qui permet de surveiller l'hybride et de détecter toute anomalie. Malheureusement, ce type d'hybridation présente des limites tant en ce qui concerne la sensibilité, la spécificité, la complexité, les conditions d'hybridation que la nécessité d'effectuer un marquage préalable par sonde. Une nouvelle méthode de détection des anomalies permet de contrôler ces réactions hybrides en temps réel. Les molécules d'ADN sont accrochées à une puce en verre recouverte d'or, laquelle est ensuite positionnée sur un microscope confocal et combinée à une cellule "flow through". Les acides complémentaires qui sont marqués avec un colorant spécifique sont ensuite passés au travers de cette cellule. Le système est alors excité sous l'effet d'une puissante énergie. Si les acides s'assemblent correctement, de l'énergie supplémentaire est libérée. Cette énergie fluorescente peut être contrôlée en ligne avec une caméra optique CCD adéquate et très sensible. Ce système permet d'effectuer une surveillance parallèle des couplages ayant lieu simultanément. Les images sont transférées vers un ordinateur et des routines logicielles d'analyse des images permettent de quantifier les réactions de couplage, de déterminer leur cadence et de détecter aisément l'apparition de toute anomalie. Ce nouveau système a fait ses preuves. Il reste à présent à trouver des partenaires industriels pour évaluer le degré d'applicabilité de ce dispositif en ligne de lecture sur puce.

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