Objetivo
The project will establish a novel high-throughput directed evolution platform for evaluating large libraries of therapeutic protein (TP) variants for increased thermostability, slower global or local unfolding rates, and minimised aggregation propensity. This will require several recent advances to be coupled into a single system. Directed evolution can be carried out by encapsulating single plasmids, each encoding a unique protein variant, into droplets of an emulsion, then using cell-free expression to generate the protein in each droplet. This project will extend this approach to incorporate non-natural amino-acid fluorophores into the protein to create a FRET-based signal that would give a direct report on protein expression levels, and then also on the stability (denaturation) of the protein (FRET-loss) upon stimulation by heating. Such heating will initially be applied to droplets in bulk for defined periods of time to allow global unfolding and aggregation, and then recooled prior to FACS sorting for variants that best retain the FRET signal. Aggregation under native (low temperature) conditions is known to be linked to local protein unfolding events that are relatively rare. To extend the screening approach for directly evolving slower local unfolding events, a fast IR-induced temperature-jump perturbation will be used to cause only local unfolding prior to FACS sorting. Such a platform would be used to directly evolve TPs with increased thermostability (slow global unfolding), and then slower local unfolding, which will combine to decrease aggregation propensity. An enzymatic system (bovine enterokinase) will be used initially to establish and validate the set-up, taking advantage of the simple fluorescent assay for enzyme activity. Once established, the set-up will then be applied to therapeutic antibody fragment proteins, using FRET to screen for retention of folded structure upon heating.
Ámbito científico (EuroSciVoc)
CORDIS clasifica los proyectos con EuroSciVoc, una taxonomía plurilingüe de ámbitos científicos, mediante un proceso semiautomático basado en técnicas de procesamiento del lenguaje natural. Véas: El vocabulario científico europeo..
CORDIS clasifica los proyectos con EuroSciVoc, una taxonomía plurilingüe de ámbitos científicos, mediante un proceso semiautomático basado en técnicas de procesamiento del lenguaje natural. Véas: El vocabulario científico europeo..
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Programa(s)
Programas de financiación plurianuales que definen las prioridades de la UE en materia de investigación e innovación.
Programas de financiación plurianuales que definen las prioridades de la UE en materia de investigación e innovación.
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H2020-EU.1.3. - EXCELLENT SCIENCE - Marie Skłodowska-Curie Actions
PROGRAMA PRINCIPAL
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H2020-EU.1.3.2. - Nurturing excellence by means of cross-border and cross-sector mobility
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Tema(s)
Las convocatorias de propuestas se dividen en temas. Un tema define una materia o área específica para la que los solicitantes pueden presentar propuestas. La descripción de un tema comprende su alcance específico y la repercusión prevista del proyecto financiado.
Las convocatorias de propuestas se dividen en temas. Un tema define una materia o área específica para la que los solicitantes pueden presentar propuestas. La descripción de un tema comprende su alcance específico y la repercusión prevista del proyecto financiado.
Régimen de financiación
Régimen de financiación (o «Tipo de acción») dentro de un programa con características comunes. Especifica: el alcance de lo que se financia; el porcentaje de reembolso; los criterios específicos de evaluación para optar a la financiación; y el uso de formas simplificadas de costes como los importes a tanto alzado.
Régimen de financiación (o «Tipo de acción») dentro de un programa con características comunes. Especifica: el alcance de lo que se financia; el porcentaje de reembolso; los criterios específicos de evaluación para optar a la financiación; y el uso de formas simplificadas de costes como los importes a tanto alzado.
MSCA-IF-EF-ST - Standard EF
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Convocatoria de propuestas
Procedimiento para invitar a los solicitantes a presentar propuestas de proyectos con el objetivo de obtener financiación de la UE.
Procedimiento para invitar a los solicitantes a presentar propuestas de proyectos con el objetivo de obtener financiación de la UE.
(se abrirá en una nueva ventana) H2020-MSCA-IF-2017
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Aportación financiera neta de la UE. Es la suma de dinero que recibe el participante, deducida la aportación de la UE a su tercero vinculado. Considera la distribución de la aportación financiera de la UE entre los beneficiarios directos del proyecto y otros tipos de participantes, como los terceros participantes.
WC1E 6BT LONDON
Reino Unido
Los costes totales en que ha incurrido esta organización para participar en el proyecto, incluidos los costes directos e indirectos. Este importe es un subconjunto del presupuesto total del proyecto.