Objectif
The project will establish a novel high-throughput directed evolution platform for evaluating large libraries of therapeutic protein (TP) variants for increased thermostability, slower global or local unfolding rates, and minimised aggregation propensity. This will require several recent advances to be coupled into a single system. Directed evolution can be carried out by encapsulating single plasmids, each encoding a unique protein variant, into droplets of an emulsion, then using cell-free expression to generate the protein in each droplet. This project will extend this approach to incorporate non-natural amino-acid fluorophores into the protein to create a FRET-based signal that would give a direct report on protein expression levels, and then also on the stability (denaturation) of the protein (FRET-loss) upon stimulation by heating. Such heating will initially be applied to droplets in bulk for defined periods of time to allow global unfolding and aggregation, and then recooled prior to FACS sorting for variants that best retain the FRET signal. Aggregation under native (low temperature) conditions is known to be linked to local protein unfolding events that are relatively rare. To extend the screening approach for directly evolving slower local unfolding events, a fast IR-induced temperature-jump perturbation will be used to cause only local unfolding prior to FACS sorting. Such a platform would be used to directly evolve TPs with increased thermostability (slow global unfolding), and then slower local unfolding, which will combine to decrease aggregation propensity. An enzymatic system (bovine enterokinase) will be used initially to establish and validate the set-up, taking advantage of the simple fluorescent assay for enzyme activity. Once established, the set-up will then be applied to therapeutic antibody fragment proteins, using FRET to screen for retention of folded structure upon heating.
Champ scientifique (EuroSciVoc)
CORDIS classe les projets avec EuroSciVoc, une taxonomie multilingue des domaines scientifiques, grâce à un processus semi-automatique basé sur des techniques TLN. Voir: Le vocabulaire scientifique européen.
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Programme(s)
Programmes de financement pluriannuels qui définissent les priorités de l’UE en matière de recherche et d’innovation.
Programmes de financement pluriannuels qui définissent les priorités de l’UE en matière de recherche et d’innovation.
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H2020-EU.1.3. - EXCELLENT SCIENCE - Marie Skłodowska-Curie Actions
PROGRAMME PRINCIPAL
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H2020-EU.1.3.2. - Nurturing excellence by means of cross-border and cross-sector mobility
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Thème(s)
Les appels à propositions sont divisés en thèmes. Un thème définit un sujet ou un domaine spécifique dans le cadre duquel les candidats peuvent soumettre des propositions. La description d’un thème comprend sa portée spécifique et l’impact attendu du projet financé.
Les appels à propositions sont divisés en thèmes. Un thème définit un sujet ou un domaine spécifique dans le cadre duquel les candidats peuvent soumettre des propositions. La description d’un thème comprend sa portée spécifique et l’impact attendu du projet financé.
Régime de financement
Régime de financement (ou «type d’action») à l’intérieur d’un programme présentant des caractéristiques communes. Le régime de financement précise le champ d’application de ce qui est financé, le taux de remboursement, les critères d’évaluation spécifiques pour bénéficier du financement et les formes simplifiées de couverture des coûts, telles que les montants forfaitaires.
Régime de financement (ou «type d’action») à l’intérieur d’un programme présentant des caractéristiques communes. Le régime de financement précise le champ d’application de ce qui est financé, le taux de remboursement, les critères d’évaluation spécifiques pour bénéficier du financement et les formes simplifiées de couverture des coûts, telles que les montants forfaitaires.
MSCA-IF-EF-ST - Standard EF
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Appel à propositions
Procédure par laquelle les candidats sont invités à soumettre des propositions de projet en vue de bénéficier d’un financement de l’UE.
Procédure par laquelle les candidats sont invités à soumettre des propositions de projet en vue de bénéficier d’un financement de l’UE.
(s’ouvre dans une nouvelle fenêtre) H2020-MSCA-IF-2017
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La contribution financière nette de l’UE est la somme d’argent que le participant reçoit, déduite de la contribution de l’UE versée à son tiers lié. Elle prend en compte la répartition de la contribution financière de l’UE entre les bénéficiaires directs du projet et d’autres types de participants, tels que les participants tiers.
WC1E 6BT LONDON
Royaume-Uni
Les coûts totaux encourus par l’organisation concernée pour participer au projet, y compris les coûts directs et indirects. Ce montant est un sous-ensemble du budget global du projet.