Objectif
DEVELOPMENT OF STABLE CLONING VECTORS IN AN IMPORTANT INDUSTRIAL MICROORGANISM : BACILLUS SUBTILIS. SUCH DEVELOPMENT HAS BEEN HINDERED SO FAR BY SEGREGATIONAL AND STRUCTURAL INSTABILITY OF RECOMBINANT PLASMIDS. INVESTIGATION OF THE MECHANISM OF PLASMID INSTABILITY IS REQUIRED FOR SUCCESSFULL GENETIC ENGINEERING NOT ONLY IN BACILLUS BUT ALSO IN OTHER POTENTIAL INDUSTRIAL GRAM POSITIVE BACTERIA.
The objectives of this project were to investigate the mechanism whereby genetic material is rearranged in, or entirely lost from cells, and based on this knowledge, to develop new systems which allow stable maintenance of foreign genetic material. The host organisms used were Escherichia coli and Bacillus subtilis. Particular emphasis was placed on investigation of the mode of replication of plasmids used as cloning vectors. The relationship between the efficiency of plasmid replication and segregational stability was examined. The fidelity with which certain sequences are duplicated when placed on plasmids which replicate by different mechanisms was evaluated. The stability of foreign genes inserted into different chromosomal locations was also studied.
The mechanism whereby genetic material is rearranged in, or entirely lost from cells was investigated and based on this knowledge, new systems which allow stable maintenance of foreign genetic material were developed. The host organisms used were Escherichia coli and Bacillus subtilis. Particular emphasis was placed on investigation of the mode of replication of plasmids used as cloning vectors. The relationship between the efficiency of plasmid replication and segregational stability was examined. The fidelity with which certain sequences are duplicated when placed on plasmids which replicate by different mechanisms was evaluated. The stability of foreign genes inserted into different chromosomal locations was also studied.
Many plasmids, which are used as cloning vectors in Gram positive bacteria, replicate by a rolling circle type mechanism. This mode of replication was found to be error prone and leads to structural instability at high frequency. Other plasmids, which replicate by a different mechanism, resulted in structural instability at a much lower frequency, making them ideal candidates for cloning vectors. It was found that a decrease in the efficiency with which plasmid replication occurs leads to segregational instability of the plasmid. An alternative to cloning genes on plasmids is to insert them into the chromosome. It was found that genes could be stably maintained in the chromosome of B subtilis. It was also found that genes could be more stably maintained in some chromosomal locations than in others. The main conclusion drawn from these studies is that deoxyribonucleic acid (DNA) replication has a profound effect on the stability of genetic information.
DEVELOPMENT OF STABLE HIGH-LEVEL EXPRESSION VECTORS WHICH WOULD REPLICATE IN BACILLUS WITH A CONSTITUTIVELY LOW AND INDUCIBLE HIGH COPY NUMBER AND A STRONG CONTROLLABLE PROMOTER.
IN PARTICULAR :
1. THE REGION INVOLVED IN THE STABLE MAINTENANCE OF THE BACILLUS ENDOGENOUS PLASMID PBAA1 WILL BE IDENTIFIED.
2. THIS REGION WILL BE COMBINED WITH REPLICONS HAVING A CONSTITUTIVELY LOW BUT INDUCIBLY HIGH COPY NUMBER.
3. IN ORDER TO CONSTRUCT STABLE EXPRESSION VECTORS, THERMOINDUCIBLE PROMOTERS (EITHER HEAT SHOCK PROMOTERS OR PROMOTERS UNDER THE CONTROL OF TEMPERATIVE SENSITIVE REPRESSORS) WILL BE CLONED ONTO THE STABLE REPLICON.
Champ scientifique (EuroSciVoc)
CORDIS classe les projets avec EuroSciVoc, une taxonomie multilingue des domaines scientifiques, grâce à un processus semi-automatique basé sur des techniques TLN. Voir: Le vocabulaire scientifique européen.
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- sciences naturelles sciences biologiques microbiologie bactériologie
- sciences naturelles sciences biologiques génétique ADN
- sciences médicales et de la santé biotechnologie médicale génie génétique
- sciences naturelles sciences biologiques génétique chromosome
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Programme(s)
Programmes de financement pluriannuels qui définissent les priorités de l’UE en matière de recherche et d’innovation.
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Thème(s)
Les appels à propositions sont divisés en thèmes. Un thème définit un sujet ou un domaine spécifique dans le cadre duquel les candidats peuvent soumettre des propositions. La description d’un thème comprend sa portée spécifique et l’impact attendu du projet financé.
Données non disponibles
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Appel à propositions
Procédure par laquelle les candidats sont invités à soumettre des propositions de projet en vue de bénéficier d’un financement de l’UE.
Données non disponibles
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Régime de financement
Régime de financement (ou «type d’action») à l’intérieur d’un programme présentant des caractéristiques communes. Le régime de financement précise le champ d’application de ce qui est financé, le taux de remboursement, les critères d’évaluation spécifiques pour bénéficier du financement et les formes simplifiées de couverture des coûts, telles que les montants forfaitaires.
Régime de financement (ou «type d’action») à l’intérieur d’un programme présentant des caractéristiques communes. Le régime de financement précise le champ d’application de ce qui est financé, le taux de remboursement, les critères d’évaluation spécifiques pour bénéficier du financement et les formes simplifiées de couverture des coûts, telles que les montants forfaitaires.
Coordinateur
DUBLIN 2
Irlande
Les coûts totaux encourus par l’organisation concernée pour participer au projet, y compris les coûts directs et indirects. Ce montant est un sous-ensemble du budget global du projet.