Objectif
DEVELOPMENT OF A STABLE GENETIC VECTOR FOR THE ANIMALS AND THE YEASTS.
Research has been carried out to isolate and study replication origins and telomeres and to assemble the different elements into linear vectors, in order to improve gene transfer in eukaryotes. The replication origins studied came from viruses (bovine papilloma virus (BPV); simian virus 40 (SV40) and African swine fever virus (ASFV)) and chromosomes from animal cells. Plasmids containing the BPV origin of replication function could be injected into Xenopus embryos. Much is known about the structure of telomeres from lower eucaryotes and these sequences were used for the assembly experiments. In addition, telomeric segments were isolated and analyzed from human cells and ASFV. The role of simple repeating deoxyribonucleic acid (DNA) sequences on integration was determined and a putative signal for integration identified. Several linear vectors were assembled and their stability determined. Extracts from cells infected with ASFV enabled the in vitro replication of DNA. Human telomeric sequences were cloned in Escherichia coli and in yeast, and theviral telomeres of ASFV were isolated. A putative signal for integration (d(CG)) was identified. A linear vector containing the BVP origin of replication and Tetrahymena telomeres was shown to be stable in Xenopus oocytes.
GOOD, AUTONOMOUSLY REPLICATING VECTORS FOR ANIMAL OR PLANT CELLS DO NOT EXIST, AND MOST ATTEMPTS TO INTRODUCE GENES INTO THESE CELLS HAVE RELIED ON THE MATERIAL BECOMING INTEGRATED INTO ONE OF THE CHROMOSOMES OF THE HOST CELL. ATTEMPTS TO MAKE USE OF ARTIFICIALLY CONSTRUCTED CIRCULAR PLASMIDS HAVE BEEN TOTALLY UNSUCCESSFUL.
IT MAY THUS VERY WELL BE THAT THE MOST APPROPRIATE VECTOR WILL NOT BE CIRCULAR, BUT WILL HAVE A LINEAR STRUCTURE. THIS PROPOSITION IS REINFORCED IF ONE CONSIDERS THAT THE CHROMOSOMES OF HIGHER ORGANISMS ARE ALMOST INVARIABLY LINEAR AND THAT CIRCULAR PLASMIDS ARE NOT NORMALLY FOUND IN THE CELLS OF THESE ORGANISMS.
IDEALLY SUCH A VECTOR SHOULD CONTAIN A CENTROMERE FUNCTION TO ENSURE ITS STABILITY AT LOW COPY NUMBER.
IT IS THE AIM OF THIS PROPOSAL TO CONSTRUCT LINEAR VECTORS, AND EVENTUALLY ARTIFICIAL LINEAR CHROMOSOMES, FOR THE PURPOSE OF IMPROVING GENE TRANSFER AND GENE CLONING IN EUKARYOTIC CELLS.
THE VECTORS WILL BE CONSTRUCTED USING COMPONENTS DERIVED FROM NATURALLY OCCURING LINEAR PLASMIDS, CHROMOSOMES, AND ANIMAL VIRUSES. THE VECTORS WILL BE DESIGNED FOR USE IN MAMMALIAN HOST CELLS, BUT THERE IS A VERY GOOD CHANCE THAT VECTORS USEFUL FOR YEASTS WILL BE PRODUCED AS FALLOUT OF THE MAIN PROJECT. APART FROM THE PRODUCTION OF POTENTIALLY USEFUL EUKARYOTIC VECTORS, FURTHER UNDERSTANDING OF REPLICATION AS WELL AS TELOMERE AND CENTROMERE WILL NO DOUBT BE GAINED.
THE POTENTIAL FOR NATURALLY OCCURING LINEAR PLASMIDS AND THE ABILITY OF THEIR ENDS TO FUNCTION AS TELOMERES WILL BE TESTED IN THE CELLS OF HIGHER ORGANISMS AND THE ABILITY OF THEIR ENDS TO FUNCTION AS TELOMERES WILL BE TESTED IN THE CELLS OF HIGHER ORGANISMS. VARIOUS ELEMENTS IDENTIFIED AS BEING POTENTIAL COMPONENTS OF AN ARTIFICIAL MINICHROMOSOME, BUT DERIVED FROM DIVERSE SOURCES, WILL BE ASSEMBLED AND THEIR FUNCTIONS TESTED AFTER INTRODUCTION INTO THE CELLS OF YEAST AND HIGHER ORGANISMS.
Champ scientifique (EuroSciVoc)
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Programmes de financement pluriannuels qui définissent les priorités de l’UE en matière de recherche et d’innovation.
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Les appels à propositions sont divisés en thèmes. Un thème définit un sujet ou un domaine spécifique dans le cadre duquel les candidats peuvent soumettre des propositions. La description d’un thème comprend sa portée spécifique et l’impact attendu du projet financé.
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Appel à propositions
Procédure par laquelle les candidats sont invités à soumettre des propositions de projet en vue de bénéficier d’un financement de l’UE.
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Régime de financement (ou «type d’action») à l’intérieur d’un programme présentant des caractéristiques communes. Le régime de financement précise le champ d’application de ce qui est financé, le taux de remboursement, les critères d’évaluation spécifiques pour bénéficier du financement et les formes simplifiées de couverture des coûts, telles que les montants forfaitaires.
Régime de financement (ou «type d’action») à l’intérieur d’un programme présentant des caractéristiques communes. Le régime de financement précise le champ d’application de ce qui est financé, le taux de remboursement, les critères d’évaluation spécifiques pour bénéficier du financement et les formes simplifiées de couverture des coûts, telles que les montants forfaitaires.
Coordinateur
ROMA
Italie
Les coûts totaux encourus par l’organisation concernée pour participer au projet, y compris les coûts directs et indirects. Ce montant est un sous-ensemble du budget global du projet.