Progresos en el desarrollo de una vacuna antimosquitos
El objetivo del proyecto financiado por la Unión Europea MOSQUITOBLOCK (Integrated biomolecular methods to control mosquito-borne diseases) era desarrollar un método no químico para controlar mosquitos, protegiendo así la cadena alimentaria, el medio ambiente y a insectos beneficiosos. En primer lugar, los investigadores llevaron a cabo una revisión bibliográfica y un análisis exploratorio de datos. Esto permitió identificar potenciales antígenos en mosquitos que podrían ser clasificados como antígenos ocultos debido a su localización en el intestino y su inducción tras la ingesta de sangre. Con el fin de identificar el mayor número posible de antígenos candidatos, este trabajo se centró en las tres principales especies de mosquitos transmisoras de enfermedades (Anopheles gambiae, Culex quinquefasciatus y Aedes aegypti). En el mosquito Anopheles gambiae se descubrió el potencial gen candidato responsable de codificar para el antígeno Trypsin-1 y, empleando cebadores específicos para este gen, se amplificó mediante de técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Asimismo, se diseñó un método alternativo para el resto de antígenos candidatos relevantes, que implicaba la selección de secuencias que codifican para péptidos localizadas en regiones con gran antigenicidad y su posterior amplificación a partir de ADN genómico. Los investigadores emplearon con éxito la técnica de PCR «touchdown» para amplificar los exones seleccionados de todos los antígenos candidatos restantes de Anopheles gambiae empleando ADN genómico. Seguidamente, estos clonaron los fragmentos de todos los candidatos empleando vectores bacterianos con etiqueta de histidina con el objetivo de producir proteínas purificadas para el ensayo inmunológico de su potencial antigénico. El equipo empleó un método de síntesis de genes para los candidatos identificados en las especies de mosquitos Culex quinquefasciatus y Aedes aegypti con el fin de obtener secuencias genéticas completas. Los tres antígenos candidatos se insertaron con éxito en el sistema bacteriano de expresión, se optimizaron para la expresión de proteínas y se tradujeron en proteínas purificadas empleando cromatografía de afinidad por ión metálico. La siguiente fase del proyecto para el ensayo de una vacuna eficaz, que no pudo iniciarse durante el proyecto, supondrá el empleo de antígenos purificados en un ensayo de inmunospot ligado a enzimas (EliSpot). Esto ayudará a identificar su capacidad para desencadenar la activación de linfocitos T, confirmando así su idoneidad para provocar una respuesta inmune. En conjunto, los investigadores de MOSQUITOBLOCK lograron identificar con éxito diferentes antígenos candidatos ocultos potenciales para las tres principales especies de mosquitos reconocidas como vectores de enfermedades. Estos antígenos fueron clonados en un sistema bacteriano de expresión que incorpora etiquetas de histidina para facilitar la visualización durante la purificación. En el caso de Aedes aegypti y Culex quinquefasciatus, los investigadores lograron purificar tres antígenos para cada una de estas especies. Estos antígenos ya están listos para ser utilizados en pruebas de inmunogenicidad y antigenicidad para determinar su capacidad para desencadenar la producción de antígenos y su potencial para afectar a la supervivencia de los mosquitos. Los descubrimientos del proyecto ayudarán a mejorar la competitividad europea impulsando al sector de la producción de vacunas gracias al desarrollo de vacunas candidato antimosquitos, que harán frente a una de las principales amenazas para la humanidad.
Palabras clave
MOSQUITOBLOCH, antígenos ocultos, Culex, Aedes, Trypsin-1, Anopheles gambiae, cebadores específicos para genes, ADN genómico, exones, PCR «touchdown», etiqueta de histidina, ensayo de inmunospot ligado a enzimas, linfocito T
