Une organisation dirigée des complexes protéiques
La définition de l'organisation spatiale est essentielle pour l'utilisation des protéines dans les applications biotechnologiques modernes, telles que l'immobilisation des anticorps ou la création de nanostructures sur des bio-modèles. La plupart des techniques actuelles ne permettent pas la co-immobilisation contrôlée de plusieurs protéines à l'échelle moléculaire. Le projet DECODEB (Defined co-immobilization by DNA binding protein tags), financé par l'UE, a développé une technologie pour créer des structures protéiques quaternaires plus avancées, que ce soit en solution ou en surface. L'objectif principal était de créer un système d'étiquette de fusion de protéines permettant la co-immobilisation des protéines par le biais d'interactions protéine-ADN. Pour les étiquettes de fusion, le projet a utilisé des protéines de liaison à l'ADN reconnaissant différentes séquences et ayant des affinités de liaison élevées, afin de fournir la liaison d'interaction protéine-ADN spécifique à la séquence. Des variantes de trois étiquettes de protéines ont été synthétisées, exprimées et purifiées, leur liaison ayant ensuite été évaluée par un test de décalage de mobilité électrophorétique. Toutes les variantes des étiquettes de liaison à l'ADN ont montré une co-liaison simultanée très spécifique à différentes sondes d'ADN à double brin contenant leurs séquences d'ADN. Pour valider le concept, les chercheurs ont testé une stratégie de fusion avec une ligation protéique arbitrée et une réticulation chimique contrôlée des protéines natives cibles avec des étiquettes protéiques de liaison à l'ADN. Cette approche, qui s'est avérée être la plus efficace, a été adoptée par le projet. Le système de co-immobilisation conçu a été utilisé avec succès pour l'amplification des signaux dans le cadre du développement d'un biocapteur à ADN. L'utilisation réussie de la conjugaison rapporteur-peroxydase pour l'amplification du signal dans le génocapteur du papillomavirus HPV16 a ouvert la voie à son utilisation comme molécule de détection universelle. En conclusion, les activités de DECODEB ont démontré l'utilité des conjugaisons pour la détection de la molécule cible et l'amplification des signaux.
Mots‑clés
Complexes de protéines, immobilisation de protéine, DECODEB, étiquette de liaison à l'ADN, biocapteur à ADN
