Objectif
This project has the goal to investigate the mechanism of dNTP interaction with human DNA polymerases alpha and beta and human immunodeficiency virus reverse transcriptase. dNTP recognition by DNA polymerases is a major determinant of specificity of DNA replication. Highly selective affinity labelling, site-directed mutagenesis of dNTP pockets and kinetic measurements of dNTP interaction will be used to solve the problem. One of the main approaches to be applied is the original technique based on the "catalytic competence. In the reaction of primer elongation of dNTP bound by base to the active centers of DNA polymerases. New photoreactive derivatives of dNTP will be synthesised and used for affinity labelling of human DNA polymerase alpha and beta, HIV-RT and HIV-RT mutants affecting dNTP pockets. The efficiency of "catalytically competent" labelling will be compared when the enzymes are irradiated in the presence of complementary, noncomplementary and blunt-ended template-primer. The structure mapping of dNTP binding pocket of DNA polymerases modified under various conditions will be performed. This study will be supplemented with the measurements of quantitative characteristics of dNTP and analogue binding to the active sites of DNA polymerases. The results obtained in solution will be compared with crystallographic data for HIV-RT and DNA polymerase beta in order to reveal the common principles of dNTP interaction with these enzymes.
Kd values for dNTP and analogues will be determined from experiments of the enzyme inactivation and competition with affinity reagents. The results obtained at the end of the project should permit: To find photoreactive analogues of dNTP which are effective strate of human DNA polymerases alpha and beta and HIV-RT in the dark and effective affinity reagents of dNTP binding pockets of these enzymes under UV-irradiation; To evaluate quantitative characteristics of dNTP and dNTP analogue interaction with various DNA polymerases; To analyse the influence of DNA template-primer on the interaction of dNTPs with the active sites of human DNA polymerases alpha and beta, HIV-RT and its mutants and to describe the difference in the arrangement of dNTP binding sites of DNA polymerases under the influence of template-primer; To compare proteolytic pattern and peptides isolated from the active sites of DNA polymerases modified in the absence or in the presence of template-primer; To compare the data obtained in solution with recent crystallographic results obtained for DNA polymerase beta and HIV-RT.
In general, the data obtained allow to get the basic understanding of the general regularities and difference in dNTP interaction with human DNA polymerases and HIV-RT. This knowledge should be very useful to design new inhibitors of HIV-RT.
Champ scientifique (EuroSciVoc)
CORDIS classe les projets avec EuroSciVoc, une taxonomie multilingue des domaines scientifiques, grâce à un processus semi-automatique basé sur des techniques TLN. Voir: Le vocabulaire scientifique européen.
CORDIS classe les projets avec EuroSciVoc, une taxonomie multilingue des domaines scientifiques, grâce à un processus semi-automatique basé sur des techniques TLN. Voir: Le vocabulaire scientifique européen.
Ce projet n'a pas encore été classé par EuroSciVoc.
Proposez les domaines scientifiques qui vous semblent les plus pertinents et aidez-nous à améliorer notre service de classification.
Vous devez vous identifier ou vous inscrire pour utiliser cette fonction
Programme(s)
Programmes de financement pluriannuels qui définissent les priorités de l’UE en matière de recherche et d’innovation.
Programmes de financement pluriannuels qui définissent les priorités de l’UE en matière de recherche et d’innovation.
Thème(s)
Les appels à propositions sont divisés en thèmes. Un thème définit un sujet ou un domaine spécifique dans le cadre duquel les candidats peuvent soumettre des propositions. La description d’un thème comprend sa portée spécifique et l’impact attendu du projet financé.
Données non disponibles
Les appels à propositions sont divisés en thèmes. Un thème définit un sujet ou un domaine spécifique dans le cadre duquel les candidats peuvent soumettre des propositions. La description d’un thème comprend sa portée spécifique et l’impact attendu du projet financé.
Appel à propositions
Procédure par laquelle les candidats sont invités à soumettre des propositions de projet en vue de bénéficier d’un financement de l’UE.
Données non disponibles
Procédure par laquelle les candidats sont invités à soumettre des propositions de projet en vue de bénéficier d’un financement de l’UE.
Régime de financement
Régime de financement (ou «type d’action») à l’intérieur d’un programme présentant des caractéristiques communes. Le régime de financement précise le champ d’application de ce qui est financé, le taux de remboursement, les critères d’évaluation spécifiques pour bénéficier du financement et les formes simplifiées de couverture des coûts, telles que les montants forfaitaires.
Régime de financement (ou «type d’action») à l’intérieur d’un programme présentant des caractéristiques communes. Le régime de financement précise le champ d’application de ce qui est financé, le taux de remboursement, les critères d’évaluation spécifiques pour bénéficier du financement et les formes simplifiées de couverture des coûts, telles que les montants forfaitaires.
Données non disponibles
Coordinateur
75251 Paris CEDEX 05
France
Les coûts totaux encourus par l’organisation concernée pour participer au projet, y compris les coûts directs et indirects. Ce montant est un sous-ensemble du budget global du projet.