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Multiplexed protein and kinase activity detection assays in complex media using impedance/capacitance

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Un nouveau système d'essai biologique

La détection de biomarqueurs protéiques dans des échantillons biologiques est essentielle à de nombreux tests de diagnostic ainsi qu'à la conception de médicaments et au développement thérapeutique. Une étude financée par l'UE a développé un système d'essai biologique innovant avec des biocapteurs spécialisés pour la détection de nombreuses protéines dans les échantillons biologiques.

Les anticorps ne fonctionnent pas correctement dans les systèmes de détection de puces à ADN. La majorité des essais d'anticorps se fonde sur un format dit en sandwich avec un anticorps secondaire marqué. Néanmoins, cette approche est longue et génère des signaux de fond importants.Pour surmonter ces limites de non spécificité, les scientifiques actifs dans le cadre du projet MPKADAIC ont recherché des solutions de remplacement. Ils ont proposé l'exploration de paramètres électriques, soit l'impédance et la capacité pour développer des essais de détection électriques de protéines. À cette fin, ils ont immobilisé des anticorps sur des électrodes en or pour détecter l'insuline, la protéine réactive C (CRP) et l'alpha-synucléine. Suite à la liaison avec les molécules cibles, les biocapteurs de protéines résultants ont provoqué des changements d'impédance électrique considérables, qui ont été suivis par spectroscopie d'impédance électrochimique faradique. Ces essais ont démontré une grande sélectivité en raison de la nature très spécifique de la liaison protéine-anticorps et la capacité d'adsorption de non spécificité réduite des électrodes. De plus, ils se sont avérés très sensibles, démontrant ainsi une capacité de détection à l'échelle picomolaire. L'accumulation de micro-organismes sur les capteurs, un phénomène appelé encrassement biologique, est un effet secondaire indésirable. Les scientifiques ont eu recours au polymère zwitterionique ou glycol polyéthylène pour recouvrir les électrodes et réduire ainsi l'encrassement. Ces deux composants ont démontré d'excellentes propriétés anti-encrassement tout en maintenant l'efficacité de liaison des anticorps. Des systèmes associés dotés de microélectrodes ont été conçus pour détecter simultanément l'insuline et la CRP dans des échantillons de sérum humain. La sensibilité de détection de ce système répondait aux normes des services de santé nationales et les mesures ont démontré une fiabilité de 80 %. Des essais multiplexés semblables sont importants pour le diagnostic de maladies complexes qui requièrent la prise de mesure de plusieurs biomarqueurs multiprotéiques pour assurer une fiabilité de diagnostic. Après avoir surmonté les obstacles tels qu'une inefficacité, un manque de fiabilité et un encrassement biologique, les systèmes de détection protéiques de MPKADAIC pourraient être utilisés pour le diagnostic hors laboratoire de nombreuses maladies.

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