Des transporteurs de molécules extrêmement efficaces
Dans le domaine de la thérapie génique, la pénétration efficace de l'information génétique dans la cellule où elle pourra effectuer sa mission est d'une importance cruciale. De fait, pour être en mesure d'agir efficacement, chaque biomolécule doit être transportée comme une cargaison vers la cellule cible. Les peptides de pénétration cellulaire (PPC) sont susceptibles d'agir comme vecteurs de molécules hydrophiles en les transférant dans la cellule à des fins thérapeutiques. En évitant les problèmes inhérents générés par l'utilisation de virus, les PPC pourraient apporter une réponse moléculaire au problème du transport de ces molécules corrigeant un défaut génétique. Dans le cadre du projet CPP, les partenaires du consortium ont cherché une solution à l'un des aspects de cette technique qui posait problème dans les recherches antérieures. Autrement dit, comment identifier et isoler les CPP les plus efficaces par criblage à haut débit (HTS, pour high throughput screening). L'équipe a pu tester des protéines marquées par un groupement fluorescent en utilisant leurs signaux spécifiques d'émission. La procédure exige l'élimination de la luminescence des peptides non-internalisés afin de pouvoir caractériser et identifier les peptides ayant pénétré dans la cellule. Une autre méthode de dépistage était basée sur le suivi de peptides non marqués. Ces peptides étaient identifiables par coloration fluorescente si la pénétration cellulaire était efficace. En élargissant leurs recherches, les scientifiques ont également utilisé le processus de biotinylation pour caractériser les meilleurs peptides de pénétration cellulaire pouvant faire office de vecteurs. La biotinylation utilise les propriétés de la biotine qui va se lier fortement avec l'avidine marquée. La molécule thérapeutique forme ainsi un complexe avec la biotine-PPC et l'avidine. Chaque protéine intracellulaire peut ensuite être quantifiée en utilisant le marquage, l'étiquette fluorescente (tag) ou l'activité enzymatique. D'autres recherches sont maintenant prévues. Elles utiliseront une lignée de souris transgéniques rapporteuses de la Cre-recombinase permettant de déterminer la spécificité tissulaire du transport par les PPC. La capacité des PPC à transférer avec succès des molécules thérapeutiques dans les cellules représente une source de potentialités très importante pour l'industrie biopharmaceutique.
