Descripción del proyecto
Visualización de la edición genética
La modificación precisa del ADN para tratar enfermedades genéticas constituye un objetivo a largo plazo de los científicos de todo el mundo. El sistema CRISPR-Cas es una adaptación de un mecanismo de defensa bacteriano y ofrece la posibilidad de editar con precisión cualquier genoma. Se compone de la nucleasa Cas9 y de una molécula de ARN que se une específicamente a la secuencia objetivo y guía a Cas9 para escindirla. El objetivo del proyecto MsgRNA, financiado con fondos europeos, es aumentar la especificidad del sistema CRISPR-Cas mediante un método de obtención de imágenes basado en la fluorescencia. Además, los científicos trabajan para reducir la degradación de los objetivos no deseados, que es un efecto secundario de los sistemas actuales. Se espera que el trabajo haga avanzar la edición genética y amplíe su funcionalidad y aplicaciones.
Objetivo
CRISPR/Cas9 has been extensively studied for genome editing, but its therapeutic application has been hampered by off-target effects. Site-specific modification of single guide (sg) RNA in CRISPR system is a potential means to expand the utility of CRISPR-Cas genome editing. To address this, and reduce of synthetic burden of sgRNA we propose a ‘click’ ligation method to synthesize sgRNA where two chemically modified oligonucleotides are joined together using CuAAC chemistry. The resultant artificial linkage is biomimetic, so it should not affect Cas9 activity. This method offers significantly higher DNA-targeting specificity (i.e. less off-target effects) and most importantly provides a cost-effective means to access thousands of synthetic sgRNAs. Imaging in CRISPR-Cas9 system using fluorescence in situ hybridisation (FISH) probes have enabled significant advancements in understanding genomic structure and transcriptional control. We will explore novel approaches to image CRISPR-Cas9 system using fluorophore-quencher pairs. The activation of fluorescence can be performed upon nuclear localisation using RNase H, and upon sgRNA binding to the target DNA. These methods will provide highly fluorescent sgRNAs for live-cell imaging, potentially much brighter compared to other methods. To control CRISPR off-target effects we will also design a light induced DNA damage method where cyanovinylcarbazole nucleoside or psolaren will be incorporated in the DNA-targeting RNA. Therefore, modification of sgRNA for CRISPR system can be used to address the biological limitations of CRISPR and expand its functionality. This will open up many avenues for future development and lead to more application-focused studies on therapeutic gene editing.
Ámbito científico (EuroSciVoc)
CORDIS clasifica los proyectos con EuroSciVoc, una taxonomía plurilingüe de ámbitos científicos, mediante un proceso semiautomático basado en técnicas de procesamiento del lenguaje natural.
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- ciencias médicas y de la saludbiotecnología médicaingeniería genéticaterapia génica
- ciencias naturalesciencias biológicasgenéticaADN
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- ciencias naturalesciencias biológicasgenéticagenoma
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Programa(s)
Régimen de financiación
MSCA-IF-EF-ST - Standard EFCoordinador
OX1 2JD Oxford
Reino Unido