Descripción del proyecto
Fomento y mejora de la comprensión de los tumores hipofisarios que afectan al crecimiento de los niños
La regulación de la transcripción génica es la forma más común de control de la expresión génica. Los intensificadores o «enhancers» son secuencias de ADN que inducen la transcripción. Aunque actúan sobre los genes de la misma molécula de ADN, pueden está situados miles de pares de bases más lejos del sitio del gen que regulan. Los promotores, en cambio, son secuencias de ADN que definen el lugar en que comienza la transcripción de un gen y hacia qué dirección avanza, y suelen estar situados unos 25–35 pares de bases arriba del punto de inicio de la transcripción. Las interacciones intensificador-promotor son fundamentales para la expresión génica. El proyecto Pituitary enhancers investiga la sobreexpresión de un gen en los tumores hipofisarios de los niños con acrogigantismo ligado al cromosoma X, que se cree que es causado por la creación de un nuevo dominio de cromatina en el lugar que se producen las interacciones «de novo» intensificador-promotor. La comprensión de estos mecanismos podría ayudar a identificar tratamientos que mejoren los resultados para los pacientes pediátricos.
Objetivo
There is a fundamental gap in understanding how the GPR101 gene regulates human growth in physiological and pathological conditions. Children’s growth is remarkably clinical relevant and is an important indicator of their health and general well-being. The specific objective of this proposal is to identify the molecular mechanisms underlying GPR101 overexpression in the pituitary tumors of children with GPR101 duplications causing X-linked acrogigantism (X-LAG).
My central hypothesis is that GPR101 duplications disrupt the structure of the local chromatin, leading to the creation of a new chromatin domain where de novo enhancer-promoter interactions take place, causing abnormal GPR101 expression. This hypothesis will be tested by pursuing three specific aims:
1. Elucidate the transcriptional regulation of GPR101 in normal and pathological conditions
2. Identify and functionally characterize novel pituitary-specific enhancer sequences
3. Investigate these regulatory sequences in patients with different pituitary pathologies.
To achieve aim 1) I will perform an in vitro functional characterization of GPR101 promoter: promoter activity will be studied by luciferase-based reporter assays, by conducting a methylation analysis, and by determining its accessibility to transcription factors.
To achieve aim 2) I will validate my preliminary results showing the formation of a novel chromatin domain by 4C-Seq. Four putative enhancer sequences located within the duplicated GPR10 region and identified in silico will be functionally evaluated in vitro to establish their impact on transcriptional activity. To identify novel pituitary-specific enhancers, a whole-genome profile of enhancer-specific histone marks will be performed in normal and tumoral pituitary cells by ChIP-Seq.
To achieve aim 3) I will screen patients with different pituitary disorders for mutations (Sanger sequencing) and structural variations (CNV assays) in the functionally-verified enhancers.
Ámbito científico (EuroSciVoc)
CORDIS clasifica los proyectos con EuroSciVoc, una taxonomía plurilingüe de ámbitos científicos, mediante un proceso semiautomático basado en técnicas de procesamiento del lenguaje natural.
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Programa(s)
Régimen de financiación
MSCA-IF-EF-RI - RI – Reintegration panelCoordinador
20100 Rozzano (Mi)
Italia