Description du projet
Promouvoir et amplifier la compréhension des tumeurs hypophysaires affectant la croissance chez les enfants
La régulation de la transcription du gène est la voie la plus utilisée pour contrôler l’expression génique. Les amplificateurs sont des séquences d’ADN qui déclenchent la transcription. Bien qu’ils agissent sur les gènes au niveau de la même molécule d’ADN, ils peuvent être situés à des milliers de paires de bases du gène régulé. Au contraire, les promoteurs sont des séquences d’ADN qui définissent l’endroit où commence la transcription d’un gène et dans quelle direction elle se fait. Ils sont classiquement situés à 25-35 paires de bases en amont du site où débute la transcription. Les interactions amplificateur-promoteur sont critiques pour l’expression du gène. Le projet Pituitary enhancers, financé par l’UE, étudie la surexpression d’un gène dans les tumeurs pituitaires des enfants qui présentent un acrogigantisme lié à l’X, supposée résulter de la création d’un nouveau domaine de chromatine où les interactions amplificateur-promoteur de novo ont lieu. Comprendre ces mécanismes pourrait mener à des traitements améliorant les résultats des patients pédiatriques.
Objectif
There is a fundamental gap in understanding how the GPR101 gene regulates human growth in physiological and pathological conditions. Children’s growth is remarkably clinical relevant and is an important indicator of their health and general well-being. The specific objective of this proposal is to identify the molecular mechanisms underlying GPR101 overexpression in the pituitary tumors of children with GPR101 duplications causing X-linked acrogigantism (X-LAG).
My central hypothesis is that GPR101 duplications disrupt the structure of the local chromatin, leading to the creation of a new chromatin domain where de novo enhancer-promoter interactions take place, causing abnormal GPR101 expression. This hypothesis will be tested by pursuing three specific aims:
1. Elucidate the transcriptional regulation of GPR101 in normal and pathological conditions
2. Identify and functionally characterize novel pituitary-specific enhancer sequences
3. Investigate these regulatory sequences in patients with different pituitary pathologies.
To achieve aim 1) I will perform an in vitro functional characterization of GPR101 promoter: promoter activity will be studied by luciferase-based reporter assays, by conducting a methylation analysis, and by determining its accessibility to transcription factors.
To achieve aim 2) I will validate my preliminary results showing the formation of a novel chromatin domain by 4C-Seq. Four putative enhancer sequences located within the duplicated GPR10 region and identified in silico will be functionally evaluated in vitro to establish their impact on transcriptional activity. To identify novel pituitary-specific enhancers, a whole-genome profile of enhancer-specific histone marks will be performed in normal and tumoral pituitary cells by ChIP-Seq.
To achieve aim 3) I will screen patients with different pituitary disorders for mutations (Sanger sequencing) and structural variations (CNV assays) in the functionally-verified enhancers.
Champ scientifique (EuroSciVoc)
CORDIS classe les projets avec EuroSciVoc, une taxonomie multilingue des domaines scientifiques, grâce à un processus semi-automatique basé sur des techniques TLN. Voir: https://op.europa.eu/en/web/eu-vocabularies/euroscivoc.
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- sciences naturellessciences biologiquesgénétiquemutation
- sciences médicales et de la santémédecine fondamentalepathologie
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MSCA-IF-EF-RI - RI – Reintegration panelCoordinateur
20100 Rozzano (Mi)
Italie