Descripción del proyecto
Estudio de la fusión celular en los músculos
El músculo esquelético consta de unidades contráctiles funcionales denominadas miofibras, que surgen de la fusión de células musculares, los mioblastos. La formación de miofibras requiere la remodelación y la fusión de las membranas plasmáticas de los mioblastos, dos procesos que hoy día no se conocen del todo. Para abordar esta brecha de conocimiento, el equipo del proyecto MYOCLEM, financiado con fondos europeos, está desarrollando métodos de microscopía óptica y electrónica en tres dimensiones que, a continuación, empleará para dilucidar los factores moleculares implicados en los cambios asociados con la remodelación de la membrana durante la fusión, así como su función. La nueva información sobre el mecanismo y la regulación de la fusión no solo mejorará la comprensión de este proceso fundamental, sino que además ayudará a diseñar nuevos tratamientos contra las miopatías.
Objetivo
Cell-to-cell fusion is a ubiquitous phenomenon essential for the physiological function of numerous tissues. A striking example is the fusion of myoblasts to form multinucleated myofibers during skeletal muscle development and regeneration. During myoblast fusion, membrane architecture must be radically remodeled. Yet, how membrane remodeling occurs on the molecular level is poorly understood as, until now, there was no approach available for visualizing dynamic changes in the cellular ultrastructure and the organization of the fusion machinery in situ.
To fill this gap, we have developed correlative light and 3D electron microscopy (CLEM) methods that allow us to identify fluorescent signals within EM samples with high sensitivity and subsequently localize the source of these signals with high precision. In this proposal, we will apply these methods in combination with live-cell imaging, biochemistry and cryo-electron tomography (ET) to deliver fundamental knowledge about the mechanism of myoblast fusion. Our specific aims are:
Aim 1: To resolve the molecular and ultrastructural events underlying cell fusion, by revealing how plasma membrane architecture is remodeled at sites of fusion using 3D EM.
Aim 2: To dissect the mechanism driving membrane remodeling during fusion, by visualizing how the fusion machinery assembles at sites of fusion and how its assembly is mirrored by changes in membrane shape, using biochemistry and live-cell imaging.
Aim 3: To determine the structure of the fusion machinery in situ, by using cryo-ET and subtomogram averaging.
Our synergetic experimental strategy will generate a quantitative, dynamic high-resolution view of the fusogenic synapse of vertebrate muscle, revealing how the fusion machinery remodels the plasma membrane at sites of fusion. These data are vital for deriving a biophysical model of myoblast fusion, understanding the general mechanism of cell fusion, and developing strategies to treat primary muscle diseases.
Ámbito científico
Programa(s)
Régimen de financiación
ERC-STG - Starting GrantInstitución de acogida
7610001 Rehovot
Israel