Ziel
- To understand the mechanisms of wheat gluten protein systhesis, transport, folding and assembly in relation to the formation of protein bodies and the structure and functional properties of gluten.
Results so far
- The production of suitable levels of in vitro synthesised gamma-gliadin in a cell free system; this has been facilitated by cloning the coding sequence of the gamma-gliadin cDNA into the pGEM3 transcription vector. Subsequent transcription and translation using this template resulted in easily detectable levels of radiolabelled protein.
- The gamma-gliadin pGEM template has been used to set up protein translocation assays in a cell free system containing pancreatic canine microsomal membranes. The translocation of the gamma-gliadin was observed, as determined by signal peptide cleavage and protease-protection assays. The use of stalled translocation-intermediates was attempted to examine the interaction between the gamma-gliadin-translocating nascent chain and chaperones such as BiP and PDI. Initial attempts utilised long nascent chains of greater than 20 kD in length. However these polypeptides have failed to produce crosslinks, indicating that such protein-protein interactions occur when the nascent chain initially enters the ER lumen. Therefore, shorter nascent chains have been generated and are at present being examined in vitro.
- Transgenic tobacco lines expressing gamma-gliadins with modified targeting information are being used for electron microscopic studies. The ultrastructure (in particular of the endomembrane system) is being examined. Immunogold labelling is being optimised for this particular system to allow the precise determination of the subcellular locations of the transgene products.
- Expression of an epitope-tagged version of the gamma-gliadin in transgenic wheat is also being carried out to determine the deposition of the protein in a homologous background. The c-myc epitope tag has been introduced, in frame, into the C-terminus of the gamma-gliadin, and this will be expressed in wheat under the control of the HMW-glutenin promoter. Transgene expression will be detected by the use of the 9E10 monoclonal against the c-myc tag.
- To determine the pathway and mechanism of gamma-gliadin translocation across the ER membrane, including interactions with proteins of the translocation machinery;
- To determine the stage at which the chaperone BiP interacts with the nascent gamma-gliadin chain to aid protein folding;
- To determine the effects of ER-localised enzymes and molecular chaperones on the folding of wheat storage proteins and their assembly into protein bodies using an in vitro system with proteins expressed in E. coli;
- To determine the assembly into protein bodies of natural and modified storage proteins in transgenic tobacco plants, and the effects of over-expression of ER localised enzymes and molecular chaperones on these processes.
Wissenschaftliches Gebiet (EuroSciVoc)
CORDIS klassifiziert Projekte mit EuroSciVoc, einer mehrsprachigen Taxonomie der Wissenschaftsbereiche, durch einen halbautomatischen Prozess, der auf Verfahren der Verarbeitung natürlicher Sprache beruht. Siehe: Das European Science Vocabulary.
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Programm/Programme
Mehrjährige Finanzierungsprogramme, in denen die Prioritäten der EU für Forschung und Innovation festgelegt sind.
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Thema/Themen
Aufforderungen zur Einreichung von Vorschlägen sind nach Themen gegliedert. Ein Thema definiert einen bestimmten Bereich oder ein Gebiet, zu dem Vorschläge eingereicht werden können. Die Beschreibung eines Themas umfasst seinen spezifischen Umfang und die erwarteten Auswirkungen des finanzierten Projekts.
Daten nicht verfügbar
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Aufforderung zur Vorschlagseinreichung
Verfahren zur Aufforderung zur Einreichung von Projektvorschlägen mit dem Ziel, eine EU-Finanzierung zu erhalten.
Daten nicht verfügbar
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Finanzierungsplan
Finanzierungsregelung (oder „Art der Maßnahme“) innerhalb eines Programms mit gemeinsamen Merkmalen. Sieht folgendes vor: den Umfang der finanzierten Maßnahmen, den Erstattungssatz, spezifische Bewertungskriterien für die Finanzierung und die Verwendung vereinfachter Kostenformen wie Pauschalbeträge.
Finanzierungsregelung (oder „Art der Maßnahme“) innerhalb eines Programms mit gemeinsamen Merkmalen. Sieht folgendes vor: den Umfang der finanzierten Maßnahmen, den Erstattungssatz, spezifische Bewertungskriterien für die Finanzierung und die Verwendung vereinfachter Kostenformen wie Pauschalbeträge.
Koordinator
BS41 9AF BRISTOL
Vereinigtes Königreich
Die Gesamtkosten, die dieser Organisation durch die Beteiligung am Projekt entstanden sind, einschließlich der direkten und indirekten Kosten. Dieser Betrag ist Teil des Gesamtbudgets des Projekts.