Obiettivo
The overall objectives of the project are to characterise the immune cells of the developmental stages of the mussel Mytilus edulis (galloprovincialis) and to develop nucleotide probes to antimicrobial peptides for investigating the expression of these antimicrobial peptides in the developmental stages of Mytilus. The project will also quantify the susceptibility of larvae to specific bacterial pathogens. The effects of environmental stressors on humoral and cellular immune function in developmental stages will be investigated and the cell/tissue specificity of the stressors identified. Finally, the project will establish whether environmental factors (temperature, specific environmental contaminants) increase the susceptibility of larvae to specific pathogens.
STATE OF PROGRESS
Immunocytochemical labelling with antibodies to adult haemocytes, total actin and Mytilus fibronectin has been carried out on larval and post larval mussels. Biochemical characterisation of actin and fibronectin in larval and post larval mussels has been carried out. The release of reactive oxygen metabolites by disaggregated trochophore and veliger larvae has been investigated. Nucleotide probes for the defence peptides, MGD-1, Mytilin, Myticin and 18S-ribosomal probe have been constructed and used to detect antimicrobial peptides in M. edulis at different developmental stages. Protocols for determining and quantifying the viability of larvae have been investigated using both staining and morphological criteria. Protocols for investigating the effects of bacterial pathogens on mussel larvae have been investigated.
ACHIEVEMENTES
The results showed that actin from larvae and postlarvae was separated by SDS-PAGE and the Western immunoblot was labelled with anti-total actin, with the antibody recognising a 43 kDa protein band. The Western blotting analysis of larval and postlarval FN showed labelling with autologous anti-FN antiserum with a 220 kDa band which was coincident with the adult Mytilus haemolymph FN used as standard. Immunocytochemical labelling identified sites for actin and fibronectin in larvae and postlarvae but failed to detect adult haemocyte antigens in the larvae. The results for release of oxyradicals showed for the NBT assay that PMA had an inhibitory effect on larval cells from both trochophore and veliger stages. LPS did appear to stimulate larval cells. With the cytochrome c assay, PMA and PLS increased the superoxide generation in the larval cells. All individual mussels expressed mytilin and myticin genes whereas only 3 out of 8 expressed MGD-1 gene. There was no hybridisation signal on RNAs from eggs and trochophore larvae, strongly suggesting the absence of antimicrobial gene expression during the first stages of development. RNAs from postlarvae as early as 1 mm showed a hybridisation signal with mytilin B and myticin A probes, within the same size range as those
DESCRIPTION OF THE WORK
Characterisation of the immune cells of the developmental stages of Mytilus will involve light and electron microscopy, immunocytochemistry, together with assays for phagocytosis and release of reactive oxygen metabolites. The development of nucleotide probes to antimicrobial peptides will involve total RNA extraction and electrophoresis and probe constructions according to the amino acid sequences. Northern blot validation will be done on untreated adults and detection of transcripts will be carried out by reverse-transcription PCR. The susceptibility of larvae to specific bacterial pathogens will be undertaken using laboratory exposure to specific concentrations of bacteria. The effects of environmental stressors on humoral and cellular immune function in developmental stages will also involve laboratory exposures. It is proposed that for all the Tasks outlined the following developmental stages will be investigated:
Trochophore larvae - no shelled ciliated planktonic stage (approximately 24-48 hours post fertilization)
Veliger larvae - shelled planktonic stage, actively swims and has functional gut (approximately 1-4 weeks post fertilization)
Postlarval stages - successfully completed settlement and metamorphosis (> 6 weeks post fertilization).
Campo scientifico (EuroSciVoc)
CORDIS classifica i progetti con EuroSciVoc, una tassonomia multilingue dei campi scientifici, attraverso un processo semi-automatico basato su tecniche NLP. Cfr.: Il Vocabolario Scientifico Europeo.
CORDIS classifica i progetti con EuroSciVoc, una tassonomia multilingue dei campi scientifici, attraverso un processo semi-automatico basato su tecniche NLP. Cfr.: Il Vocabolario Scientifico Europeo.
- scienze naturali scienze fisiche ottica microscopia electron microscopy
- scienze mediche e della salute medicina di base immunologia
- scienze naturali scienze biologiche genetica nucleotidi
- scienze naturali scienze biologiche genetica RNA
- scienze naturali scienze chimiche chimica organica ammine
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Programma(i)
Programmi di finanziamento pluriennali che definiscono le priorità dell’UE in materia di ricerca e innovazione.
Programmi di finanziamento pluriennali che definiscono le priorità dell’UE in materia di ricerca e innovazione.
Argomento(i)
Gli inviti a presentare proposte sono suddivisi per argomenti. Un argomento definisce un’area o un tema specifico per il quale i candidati possono presentare proposte. La descrizione di un argomento comprende il suo ambito specifico e l’impatto previsto del progetto finanziato.
Gli inviti a presentare proposte sono suddivisi per argomenti. Un argomento definisce un’area o un tema specifico per il quale i candidati possono presentare proposte. La descrizione di un argomento comprende il suo ambito specifico e l’impatto previsto del progetto finanziato.
Invito a presentare proposte
Procedura per invitare i candidati a presentare proposte di progetti, con l’obiettivo di ricevere finanziamenti dall’UE.
Dati non disponibili
Procedura per invitare i candidati a presentare proposte di progetti, con l’obiettivo di ricevere finanziamenti dall’UE.
Meccanismo di finanziamento
Meccanismo di finanziamento (o «Tipo di azione») all’interno di un programma con caratteristiche comuni. Specifica: l’ambito di ciò che viene finanziato; il tasso di rimborso; i criteri di valutazione specifici per qualificarsi per il finanziamento; l’uso di forme semplificate di costi come gli importi forfettari.
Meccanismo di finanziamento (o «Tipo di azione») all’interno di un programma con caratteristiche comuni. Specifica: l’ambito di ciò che viene finanziato; il tasso di rimborso; i criteri di valutazione specifici per qualificarsi per il finanziamento; l’uso di forme semplificate di costi come gli importi forfettari.
Coordinatore
PL1 3DH Plymouth
Regno Unito
I costi totali sostenuti dall’organizzazione per partecipare al progetto, compresi i costi diretti e indiretti. Questo importo è un sottoinsieme del bilancio complessivo del progetto.