Cuantificación de las nucleoporinas humanas
El NPC se ubica en la membrana nuclear, formando una puerta de entrada que regula el intercambio de moléculas entre el núcleo y el citoplasma. Está conformado por cerca de treinta elementos básicos o nucleoporinas. En la actualidad, no es posible la resolución atómica de los modelos estructurales pues no se conoce con precisión la composición del NPC. El objetivo del proyecto financiado por la Unión Europea NPCQUANT (Investigation of human nucleoporins stoichiometry and intracellular distribution by quantitative mass spectrometry) es definir la estequiometría del NPC en células humanas. El proyecto diseñó estudios proteómicos dirigidos para cuantificar las treinta y dos nucleoproteínas con gran precisión y reproducibilidad. Los científicos aislaron núcleos y membranas nucleares íntegras de muchas células para medir la estequiometría del NPC completamente ensamblado in situ. Esta estructura también se definió por microscopia crioelectrónica. Se comparó la composición del NPC en diferentes líneas celulares neoplásicas. Los cambios estequiométricos en los componentes periféricos de diferentes líneas celulares neoplásicas revelaron diferencias en la composición del NPC. El proyecto desarrolló líneas celulares estables que expresan moléculas de ARN micro inducibles, dirigidas a diferentes nucleoproteínas. Estas líneas celulares constituyen herramientas muy importantes para la investigación estructural y funcional de los componentes individuales del NPC. NPCQUANT permitió conocer la estructura de la matriz del NPC, alcanzando así un objetivo ya antiguo en biología estructural. Además, diseñaron estudios proteómicos dirigidos y líneas celulares que son de utilidad en la caracterización de la función de las nucleoporinas en el transporte nucleocitoplasmático.
Palabras clave
Nucleoporinas, complejo del poro nuclear, proteómica, ensayo, microscopia electrónica
