Approfondir la biomécanique de la maladie
Les micro-ARN (ARNmi) se développent en deux étapes au cours d'une voie impliquant les complexes de traitement Drosha-DCGR8 et Dicer-PACT-TRBP. Ces ribonucléases sont recrutées par des protéines accessoires de liaison à l'ARN qui interagissent avec les caractéristiques structurelles des ARNmi immatures. Le projet oncoMiRNA-biogenesis («Biogenesis of oncogenic microRNAs: from the structure of the microRNA processing complexes to the inhibition of the maturation of human oncogenes») oeuvre à une analyse pluridisciplinaire de réseaux de l'interaction biomoléculaire impliquée dans les processus de production de l'ARNmi humain. Les partenaires du projet visent à cloner, exprimer et dépister les domaines solubles pris de protéines de traitement modulaire, et utiliseront pour cela des méthodes de résonance magnétique nucléaire (RMN) pour évaluer les replis de protéines et d'ARN ainsi que les sites d'interaction protéine/ARN. Les expériences viseront à définir le rôle des protéines de biogenèse, et décriront les mécanismes de reconnaissance de l'ARN puis parviendront à la première image de résolution atomique des complexes de traitement de l'ARNmi. Une telle approche devrait poser les bases de la conception et de tests d'inhibiteurs de biogenèse d'ARNmi en vue de découvrir les moyens de tester la fonction de l'ARNmi ou le potentiel de nouveaux traitements anti-cancéreux. À l'heure actuelle, ce projet financé par l'UE a identifié des constructions de domaines potentielles pour des protéines pluridomaines impliquées dans la production d'ARNmi et ont fourni un concept initial de constructions à partir des protéines accessoires de biogenèse de l'ARNmi. Les partenaires ont également mené un clonage automatisé et des tests de l'expression, sont parvenus à une analyse par spectroscopie RMN et biophysique des caractéristiques des processus de biogenèse de l'ARNmi et optimisé la production in vitro de l'ARNmi. Parmi les réalisations du projet, citons l'analyse de certaines interactions inter et intramoléculaires qui ont abouti à la production de quantités mg d'ARN pour l'analyse RMN et au développement de stratégies d'étiquettage des isotopes pour l'analyse RMN des interfaces biomoléculaires. Les partenaires du projet oncoMiRNA-biogenesis s'attendent à ce que les travaux permettent d'atteindre une analyse structurelle de la machinerie de la biogenèse de l'ARNmi et la cartographie des interactions protéine/protéine et protéine/ARN par spectroscopie RMN et autres techniques biologiques. Ils souhaitaient également développer un modèle à haute résolution pour décrire les interfaces et interactions biomoléculaires critiques jouant un rôle dans la biogenèse de l'ARNmi.
