Studio più approfondito della biomeccanica della malattia
I micro-RNA (miRNA) maturano in due fasi lungo il pathway dei complessi di processamento di Drosha-DCGR8 e Dicer-PACT-TRBP. Queste ribonucleasi vengono reclutate da proteine accessorie leganti l'RNA multi-dominio che interagiscono con caratteristiche strutturali specifiche di miRNA immaturi. Il progetto oncoMiRNA-biogenesis (Biogenesis of oncogenic microRNAs: from the structure of the microRNA processing complexes to the inhibition of the maturation of human oncogenes) sta conducendo un'analisi multidisciplinare delle reti di interazione biomolecolare coinvolte nei processi di produzione di miRNA umano. Con lo scopo di clonare, esprimere ed esaminare i domini solubili presi dalle proteine di processamento modulare, i partner di progetto useranno anche metodi di risonanza magnetica nucleare (NMR) per valutare le pieghe di proteine e RNA e i siti di interazione proteine-RNA. Gli esperimenti si concentrano sulla definizione del ruolo delle proteine di biogenesi, descrivendo i meccanismi di riconoscimento di RNA e ottenendo la prima immagine di risoluzione atomica dei complessi di processamento di miRNA. Si prevede che questo approccio getterà le basi per la progettazione e l'analisi degli inibitori della biogenesi di miRNA con lo scopo di svelare i mezzi per esaminare il funzionamento di miRNA o nuove potenziali terapie tumorali. Finora il progetto finanziato dall'UE ha identificato potenziali costrutti di domini dalle proteine multi-dominio che partecipano alla produzione di miRNA e ha fornito una progettazione iniziale dei costrutti dalle proteine accessorie di biogenesi di miRNA. I partner hanno inoltre condotto analisi automatizzate di clonazione ed espressione, hanno ottenuto un'analisi biofisica e con spettroscopia NMR delle caratteristiche dei processi di biogenesi di miRNA e hanno ottimizzato la produzione in vitro di miRNA. Altri risultati del progetto includono l'analisi di determinate interazioni inter- e intra-molecolari, la produzione di quantità di mg di RNA per l'analisi NMR e lo sviluppo di strategie di etichettatura degli isotopi per un'analisi basata su NMR delle interfacce biomolecolari. I partner di oncoMiRNA-biogenesis prevedono che il lavoro in corso consentirà di ottenere un'analisi strutturale dei meccanismi di biogenesi di miRNA e la mappatura delle interazioni proteina-proteina e proteina-RNA tramite spettroscopia NMR e altre biotecniche. Puntano anche a sviluppare un modello ad alta risoluzione per descrivere le interfacce biomolecolari critiche e le interazioni che partecipano alla biogenesi di miRNA.
