Transferencia de genes muy específica
La modificación directa de un gen diana en su ubicación genómica sin necesidad de introducir nuevas secuencias redundantes plantea una estrategia atractiva para la terapia génica. La modificación genética dirigida («gene targeting») fue posible gracias a ligandos de unión al ADN específicos de secuencia tales como los oligonucleótidos de cadena sencilla (ssODN), los oligonucleótidos formadores de triple hélice (TFO) o los ácidos nucleicos peptídicos (PNA). Los socios del proyecto financiado por la Unión Europea Sniper («Oligómeros de secuencia específica para la reparación del ADN in vivo») habían desarrollado anteriormente un método de modificación genética dirigida que utilizaba oligómeros (RO) compuestos de dos dominios funcionales. En dicho método, el dominio diana («targeting domain») proporciona una afinidad de secuencia alta para la porción del genoma que se desea mientras que ??el dominio plantilla («template domain») activa la maquinaria de reparación celular para inducir pequeños cambios de secuencia sin añadir secuencias extrañas. El objetivo de los socios de Sniper era seguir perfeccionando el diseño de esta plataforma de tecnología de oligómeros para mejorar el porcentaje de cambios inducidos correctos que afectan a una sola base en las lecturas de cultivos celulares. Para conseguirlo, los investigadores estudiaron los parámetros biológicos implicados en los cambios en el genoma inducidos por ssODN. Por otra parte, modificaron las bases de los TFO para aumentar la estabilidad de la triple hélice y la cinética de unión. Los miembros del consorcio estudiaron asimismo otras moléculas capaces de reconocer el ADN e inducir la recombinación como los PNA y las nucleasas de dedos de zinc (ZFN). Las ZFN son enzimas de restricción artificiales originadas por la fusión de un dominio de unión al ADN (los dedos de zinc), que reconoce un punto concreto del ADN y se une a él, y de un dominio de escisión formado por una nucleasa que ha sido modificada de manera que pueda reconocer y cortar a medida secuencias específicas de ADN. En conjunto, todos los ligandos de unión al ADN analizados a lo largo del proyecto Sniper ofrecieron posibilidades de unirse específicamente a una secuencia de ADN determinada y, por lo tanto, de reparar genes. Las aplicaciones de estos oligómeros son bastante amplias y además de para fines científicos se prevé su utilización como vectores alternativos de transferencia de genes.
