La ristrutturazione dei cromosomi durante la mitosi
Le cellule eucariote possiedono diversi grandi cromosomi lineari localizzati nel nucleo della cellula. Durante l’interfase, quando la cellula non si divide, il DNA è nella sua fase meno condensata e appare sciolto e omogeneamente distribuito in tutto il nucleo. Durante la divisione cellulare, i cromosomi devovo formare corpi compatti a bastoncello, in modo che una copia del genoma possa spostarsi in ciascuna delle cellule nascenti. Il progetto Marie-Curie CHROMOSOME PERIPHERY (“Assembly and function of the chromosome periphery during mitosis”), finanziato dall’UE, è stato avviato per chiarire i meccanismi molecolari coinvolti durante la riorganizzazione dei cromosomi dovuta al ciclo cellulare. I ricercatori hanno lavorato per determinare una mappa dettagliata delle proteine indirizzate sullo strato pericromosomico e sull’asse cromosomico. È stata determinata la localizzazione di una proteina assiale del cromosoma, topoisomerasi II alpha, nelle cellule di divisione (mitotiche) e non sincronizzate HeLa, utilizzando un approccio biochimico (immunoprecipitazione cromatinica seguita da sequenziamento), che ha consentito l’identificazione di circa 4000 siti di legame del DNA. Tale approccio potrebbe essere esteso alle proteine cromosomiche periferiche. È stata utilizzata la microscopia confocale tridimensionale su cellule vive per analisi di imaging di otto proteine dello strato pericromosomico in cellule mitotiche. Questo studio ha prodotto una mappa spazio-temporale dell’assemblaggio periferico dei cromosomi. I ricercatori hanno anche sviluppato approcci di screening per la rilevanza funzionale dei componenti cromosomici periferici durante la mitosi. Sono state create piastre per lo screening di trasfezioni su fase solida, e i primi esperimenti pilota indicavano la fattibilità dello screening. Nel complesso questo progetto ha ottenuto dati che forniscono conoscenze sul modo in cui i domini dell’asse e delle estremità cromosomici contribuiscono alla formazione dei cromosomi durante la mitosi.
Parole chiave
Cromosomi, divisione cellulare, topoisomerasi II alfa, ChIP-seq, proteine dello strato pericromosomico, morfogenesi mitotica, piastre per lo screening di transfezione
