Objectif
G protein-coupled receptors (GPCRs) are eukaryotic seven-alpha-helix transmembrane proteins which are involved in extracellular signal transduction across the cellular membrane. Aim of the proposed research is to structurally characterise ligand-induced conformational changes in GPCRs, to identify the number of alternative conformations the GPCR can adopt, and to engineer conformationally stabilised GPCR variants for subsequent biophysical and crystallographic studies. The research will focus on cannabinoid receptor type 2 and beta-1 adrenergic receptor. Both GPCRs can be expressed and purified from recombinant Escherichia coli as well as insect and mammalian cells. Degree of ligand-induce conformational change will be determined for each amino acid residue by using a novel protein-engineering approach that combines alanine scanning mutagenesis and conformational phi-value analysis. Transition temperatures of denaturation for native and each mutated protein will be determined in presence and absence of particular ligand by high-throughput differential scanning fluorimetry or radioligand-binding assays. These results will be used in engineering of GPCR mutants that are more stable and locked in the specific (eg, activated or inactive) conformational state. Ligand-binding to the stabilised mutants and their functionality will be monitored by fluorescence anisotropy titrations, as well as by radioactive assays using the corresponding G proteins. The stable and functional variants will be used in crystallisation trials. The diffraction data from the expected microcrystals will be collected on the microfocus X-ray beamline. Crystal structures will be determined by molecular replacement. The proposed research will give insights into the activation mechanisms of GPCRs. Detailed understanding of the conformational changes accompanying receptor activation is a prerequisite for rational design of therapeutic drugs affecting GPCRs.
Champ scientifique (EuroSciVoc)
CORDIS classe les projets avec EuroSciVoc, une taxonomie multilingue des domaines scientifiques, grâce à un processus semi-automatique basé sur des techniques TLN. Voir: Le vocabulaire scientifique européen.
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- ingénierie et technologie ingénierie des materiaux cristaux
- sciences naturelles sciences biologiques biochimie biomolécule protéines
- sciences naturelles sciences biologiques zoologie entomologie
- sciences naturelles sciences chimiques chimie organique amines
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Programme(s)
Programmes de financement pluriannuels qui définissent les priorités de l’UE en matière de recherche et d’innovation.
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Thème(s)
Les appels à propositions sont divisés en thèmes. Un thème définit un sujet ou un domaine spécifique dans le cadre duquel les candidats peuvent soumettre des propositions. La description d’un thème comprend sa portée spécifique et l’impact attendu du projet financé.
Les appels à propositions sont divisés en thèmes. Un thème définit un sujet ou un domaine spécifique dans le cadre duquel les candidats peuvent soumettre des propositions. La description d’un thème comprend sa portée spécifique et l’impact attendu du projet financé.
Appel à propositions
Procédure par laquelle les candidats sont invités à soumettre des propositions de projet en vue de bénéficier d’un financement de l’UE.
Procédure par laquelle les candidats sont invités à soumettre des propositions de projet en vue de bénéficier d’un financement de l’UE.
FP7-PEOPLE-2010-IEF
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Régime de financement
Régime de financement (ou «type d’action») à l’intérieur d’un programme présentant des caractéristiques communes. Le régime de financement précise le champ d’application de ce qui est financé, le taux de remboursement, les critères d’évaluation spécifiques pour bénéficier du financement et les formes simplifiées de couverture des coûts, telles que les montants forfaitaires.
Régime de financement (ou «type d’action») à l’intérieur d’un programme présentant des caractéristiques communes. Le régime de financement précise le champ d’application de ce qui est financé, le taux de remboursement, les critères d’évaluation spécifiques pour bénéficier du financement et les formes simplifiées de couverture des coûts, telles que les montants forfaitaires.
Coordinateur
5232 VILLIGEN PSI
Suisse
Les coûts totaux encourus par l’organisation concernée pour participer au projet, y compris les coûts directs et indirects. Ce montant est un sous-ensemble du budget global du projet.