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Tracking the movement and dynamics of Holliday junctions

Descrizione del progetto

Monitorare la riparazione dei danni al DNA

La riparazione dei danni al DNA è fondamentale per mantenere l’integrità genomica e prevenire il cancro. La ricombinazione omologa garantisce la riparazione delle rotture del doppio filamento nel DNA attraverso intermediari chiave noti come giunzioni di Holliday (HJ, Holliday Junctions). Il progetto HollidayTrack, finanziato dall’UE, svilupperà strumenti molecolari per individuare e determinare le proprietà dinamiche delle strutture delle HJ nelle cellule. Esso affronterà l’impatto della struttura locale della cromatina sulla migrazione e sulla risoluzione delle HJ, nonché il ruolo delle HJ nella biologia dei telomeri. Complessivamente, i risultati del progetto miglioreranno la nostra conoscenza su modelli e distribuzioni relativi alla formazione e alla migrazione delle HJ in diversi tipi di cellule tumorali.

Obiettivo

omologous recombination (HR) is a DNA repair pathway that plays a central role in the maintenance of genomic stability and cancer prevention. In the late stages of HR, recombination intermediates (Holliday junctions, HJs) need to be resolved to allow proper chromosome segregation. Whilst HJ processing reactions have been well characterised in vitro, there is limited knowledge of the dynamic properties of these structures within a cellular context. To explore the biological properties of HJs in vivo, I will use site-specific DNA cleavage and ChIP-sequencing techniques to reveal the distance of HJ migration from the site where HR is initiated. The ability of HJs to branch migrate spontaneously or be driven by potential HJ translocases will be determined using RAD54, BLM, WRN, RECQ1, RECQ5 and FANCM deficient cells. To enable these studies, my first challenge will be to develop a molecular tool that specifically detects HJs in vivo, that can be used to monitor the appearance and kinetics of HJs after DNA double strand break formation. The specific DNA break sites and corresponding HJ migration will be determined with respect to the dynamic chromosome domain architecture and organisation within human cells, which will provide valuable insights into the impact of local chromatin structure on HJ migration and resolution. Additionally, the newly developed HJ-specific tools may be applied to ask a wide range of questions relating to the role of HJs in telomere biology and replication fork reversal or to study patterns and distributions of HJ formation and migration in different cancer cell types.

Campo scientifico (EuroSciVoc)

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Coordinatore

THE FRANCIS CRICK INSTITUTE LIMITED
Contribution nette de l'UE
€ 212 933,76
Indirizzo
1 MIDLAND ROAD
NW1 1AT London
Regno Unito

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Regione
London Inner London — West Camden and City of London
Tipo di attività
Research Organisations
Collegamenti
Costo totale
€ 212 933,76