Nowy bank przeciwciał monoklonalnych
W ramach badania wygenerowano wiele przeciwciał monoklonalnych (mAb) przeciw tysiącom białek, które mogą być wykorzystane w testach diagnostycznych do wykrywania substancji, w leczeniu nowotworów do odpowiedzi immunologicznej przeciw docelowym komórkom rakowym, w leczeniu chorób autoimmunologicznych do hamowania reakcji zapalnej. Hybrydowe linie komórkowe mogą być także wytwarzane poprzez zespolenie określonych komórek B produkujących przeciwciała z komórką rakową. W związku z tym zakres zastosowań terapeutycznych dla mAb jest niezwykle szeroki, a liczba różnych gatunków do leczenia wirusów, raka czy zaburzeń układu immunologicznego, a także identyfikacji substancji, wydaje się niemal nieskończona. W obliczu zapotrzebowania na te potencjalne cuda molekularne, uczestnicy finansowanego ze środków UE projektu CAPRI rozpoczęli badania i powołali jednostkę biotechnologiczną przeznaczoną do produkcji mAb oraz pełniącą rolę banku hybrydom oraz mAb. Pierwszym celem było wytworzenie mAb przeciw białkom wszelkich istotnych wirusów ludzkich, począwszy od całego proteomu wirusa ospy wietrznej-półpaśca (VZV), wywołującego obie te choroby u człowieka. Podstawowe badania przesiewowe nad białkiem wytwarzanym w komórkach Escherichia coli przeprowadzono przy użyciu testu ELISA, a następnie metody western blot (WB). Do obserwacji komórek zakażonych VZV użyto mikroskopii konfokalnej oraz metody WB. Aby zapobiec wytworzeniu mAb, które nie zdołałyby zareagować na ich naturalne przeciwciała pochodzące z komórek zakażonych VZV, naukowcy zastosowali dwie różne strategie. Pierwszą z nich była fragmentacja oryginalnych otwartych ramek odczytu (ORF), gdzie nie istnieje kodon "STOP", w związku z czym mogą zostać użyte do produkcji białka. W ten sposób można uniknąć potencjalnych regionów hydrofobowych i przezbłonowych. W ramach drugiej strategii zespół przyjął system ekspresji bakulowirusa; powstałemu w wyniku tego działania bakulowirusowi brak jednego z nieistotnych genów, który zastąpiono genem obcym. Podobnie jak inicjatywę badawczą, podejście praktyczne zorganizowano dla wszystkich badaczy zainteresowanych mAb. Letni obóz szkoleniowy pod hasłem "Wrodzona odporność na infekcje wirusowe", spotkania dyskusyjne dotyczące potencjalnej współpracy oraz indywidualne konsultacje w zakresie technik mAb na Uniwersytecie w Rijece zachęciły do interakcji ekspertów w tej dziedzinie. Z kolei w sieci powstała regularnie aktualizowana baza danych, wyposażona w oprogramowanie do zarządzania laboratorium "webLAB", zawierająca szczegółowe informacje na temat białek, hybrydom oraz mAb. Podsumowując, imponujące wyniki inicjatywy CAPRI przyczynią się do podniesienia jakości materiałów poświęconych stosowaniu genomiki i biotechnologii do celów zdrowotnych.
