Mikroskopia dwufotonowa w obrazowaniu aktywacji limfocytów T
Interakcje między komórkami dendrytycznymi (DC) a limfocytami T odgrywają główną rolę w trakcie wywoływania odpowiedzi immunologicznej oraz w tolerancji immunologicznej. Komórki DC to wyspecjalizowane komórki, które wychwytują antygeny w tkankach peryferyjnych i migrują do peryferyjnych węzłów chłonnych drenujących, gdzie dochodzi do prezentacji kompleksu pMHC dziewiczym limfocytom T. Celem projektu INVIVO TCELL IMAGING, finansowanego ze środków UE, było wyjaśnienie roli izoformy należącej do rodziny enzymów PI3K w aktywacji limfocytu T. Kinazy PI-3 należą do rodziny powiązanych enzymów będących przetwornikami sygnałów wewnątrzkomórkowych. Biorą udział w procesach komórkowych, takich jak wzrost komórki, proliferacja, różnicowanie, poruszanie, przetrwanie oraz transport i segregacja białek, które z kolei biorą udział w rozwoju nowotworu. Najlepiej poznaną izoformą PI3K biorącą udział w szlaku sygnalizacji receptora limfocytu T jest PI3Kdelta lub p110delta. Naukowcy skorzystali z modelu mysiego, noszącego celową mutację w domenie katalitycznej p110delta. U badanych myszy aktywność kinazy lipidowej p110delta została całkowicie zniesiona przy braku zmian aktywności kinaz p110alpha i p110beta. Naukowcy wykorzystali technikę obrazowania mikroskopowego dwufotonowego (2PM), w połączeniu z modelami zapalenia, cytometrią przepływu oraz innymi technikami w celu zbadania roli izoformy p110delta w aktywacji limfocytu T CD4+. Zbadali również efekty odgórne aktywowanych limfocytów T w obecności lub przy braku funkcjonalnej izoformy p110δ. Analizę przeprowadzono na modelu mysim zapalenia stawów. Zwierzęta znieczulono przez podskórne podanie metylowanej surowiczej albuminy wołowej (mBSA) i albuminy jaja kurzego (OVA) emulsyfikowanej w kompletnym środku wspomagającym Freunda. Zapalenie stawów indukowano przez podanie mBSA i OVA w lewy staw kolanowy, podczas gdy w prawy staw kolanowy podawano PBS jako kontrolę. Zwierzęta badano w różnych odstępach czasu od indukcji zapalenia stawów. Wyniki histologii wykazały masywne nacieki komórkowe do stawów myszy, a zapalenie utrzymywało się w obecności limfocytów T typu dzikiego. Dane wskazywały na masywną rekrutację neutrofili już w 1 dniu oraz pojawienie się monocytów w dniu 3. Monocyty obecne były do 14 dnia badania. W momencie wystąpienia objawów zapalenia stawów, populacja limfocytów T u osobników noszących mutację p110delta została całkowicie usunięta z węzłów chłonnych, jak również z tkanki okołostawowej. Podsumowując, dane uzyskane w trakcie trwania projektu pozwoliły na kompletną analizę molekularną działania zapalnego p110delta.